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风逝zhilv

金虫 (正式写手)

[交流] RT-PCR 已有2人参与

为保证RNA定量的准确性，如何确定用于逆转录的RNA的量？什么时候要稀释模板？稀释的倍数如何确定？？
    在某处看到逆转录时
"RNA的体积要小于等于逆转录体系的1/10"
请问这是什么意思啊，不是一般都是25μL的体系里加5μL的RNA么？
求解！！！
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为梦想而努力，不做生活的奴隶！
1楼 2012-05-10 14:43:36
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孙启亮

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+2, Good！ 2012-05-12 23:14:28
我们一般在反转录体系里面加入1微克的RNA。稀释模板的原因是反转录试剂可能会对PCR的酶活性有抑制作用，稀释倍数好像无明确规定，稀释的结果是使你的目的基因扩增更容易。RNA的体积问题，你看到的这个问题应该是对荧光定量PCR的要求，因为你做的是普通PCR，所以不必在意。
个人能力有限，可能有错误的地方请高手指正。
赞一下 回复此楼
2楼2012-05-10 15:11:17
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常晨城
3楼2012-05-12 22:49:54
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