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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 重组蛋白含半胱氨酸纯化过程如何保护巯基
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cuiyoutian88

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
baby1_9253344: 金币+4, ★★★很有帮助, 就是需要您这样的经验之谈 2012-05-13 10:43:25
我是在破碎时候就加入千分之0.5的dtt,然后最后透析..
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11楼2012-05-13 10:40:36
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by cuiyoutian88 at 2012-05-13 10:40:36:
我是在破碎时候就加入千分之0.5的dtt,然后最后透析..

我还想请教一下，透析之后，巯基不就没有东西保护了吗？这个时候怎么办？换还原剂吗？还是更改pH？
如果蛋白透析之后马上冻干，会不会在冻干过程再还原？
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12楼2012-05-13 10:44:49
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tiandizao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by baby1_9253344 at 2012-05-10 16:48:01
请问~这个还原剂的浓度大概多大合适呢？就是多大浓度才能起到还原作用呢？太大了的话是不是会不可逆变性啊？

另，
文献中我这类蛋白他们用的是肝素亲和柱纯化的，洗脱剂都是含巯基乙醇的，不晓得是什么tag。我 ...

没必要在专业上把自己限至死了，应该学会变通，换一个tag并没有你想的那么难
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不断的修正问题，改正错误中走向永恒
13楼2012-07-13 15:18:38
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edoz1986

新虫 (小有名气)
镍柱可以接受2mm一下dtt浓度。如果你有钱的话可以用tcep，它对柱子没有影响。
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14楼2013-05-23 10:05:29
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sspxiaoji

银虫 (正式写手)
加MET
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15楼2013-05-29 10:08:45
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