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建立完善的耐药金黄色葡萄球菌细菌生物膜模型方法；对中药材大黄提取分离纯化，同时对大黄中分离得到的部分化合物进行对细菌及细菌生物膜作用的活性研究。考察具有抗菌作用的中药单体化合物大黄蒽醌类化合物对耐药细菌生物膜的作用；筛选出对耐药细菌生物膜具有较强抑制作用的中药活性单体，并考察其与大黄蒽醌类单体化合物及Rb1联合应用对细菌生物膜的影响。 通过96孔板进行微量培养，采用SEM和CLSM观察耐药细菌生物膜的形成及形态，建立耐药金黄色葡萄球菌细菌生物膜模型；以耐药金黄色葡萄球菌生物膜模型为药物筛选模型；采用微量肉汤稀释法筛选与大黄蒽醌单体及Rb1联合用药对细菌及生物膜产生有效作用的其他中药单体；将大黄单体提取物、中药单体化合物与细菌及细菌生物膜共同培养，通过酶标仪测取OD值从而测定细菌及生物膜的生长能力，通过计算抑菌率和F值来观察各样品单独及联合用药对细菌及生物膜抑制作用的大小。 通过酶标仪测定OD值及扫描电子显微镜（SEM）和激光共聚焦电子显微镜（CLSM）的镜下观察的结果，确定耐药菌金黄色葡萄球菌在37℃培养24h时，形成生物膜；大黄蒽醌单体对正常金黄色葡萄球菌的抑制率最高达78.17%，大黄蒽醌单体对耐药金黄色葡萄球菌的抑制率最高达62.62%；筛选出单体瑞香素、焦没食子酸、硫酸氢小檗碱对金黄色葡萄球菌及BBF具有很强的抑制作用，焦没食子酸对耐药金黄色葡萄球菌的抑制率最高达71.78%，硫酸氢小檗碱对耐药金黄色葡萄球菌的抑制率最高达72.14%，瑞香素对耐药金黄色葡萄球菌的抑制率最高达73.22%；联合用药结果显示：瑞香素、焦没食子酸、硫酸氢小檗碱与大黄酸联合应用，对正常和耐药金黄色葡萄球菌及BBF产生一定协同抑制作用；人参皂苷Rb1与瑞香素联合应用，对正常大肠杆菌及BBF产生一定协同抑制作用。 结论：通过扫描电子显微镜（SEM）和激光共聚焦电子显微镜（CLSM）实验，建立了耐药细菌生物膜模型；通过中药单体化合物对BBF的作用，进一步验证了微量法作为筛选治疗慢性感染性疾病药物模型的可行性。筛选出对细菌及BBF具有较强抑制作用的大黄蒽醌单体，并与瑞香素、焦没食子酸、硫酸氢小檗碱联合应用对正常和耐药金黄色葡萄球菌及BBF产生一定的协同抑制作用，这为寻找联合用药代替抗生素药物，治疗慢性感染性疾病的深入开发研究，提供科学的依据，为后续研究打下良好的基础。 |
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