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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆质粒上的基因需要将质粒酶切成线性吗？
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查看: 2014  |  回复: 15
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zgb1982

木虫 (正式写手)
imbest110: 回帖置顶 2012-05-06 10:45:18
如果酶切位点不合适就直接设计带有合适酶切位点的引物PCR就行了，不需要酶切了。
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11楼2012-05-03 10:10:37
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-03 13:49:00
imbest110: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-06 10:44:56
有序列的话直接设计引物扩增就可以了，当然如果有合适的酶切位点也可以用，个人意见是pcr扩增
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12楼2012-05-03 10:34:26
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mdtdtao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
imbest110: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-06 10:45:09
不需要酶切，直接设计好引物PCR就好了，而且这种以质粒为模板的克隆，成功概率相当高的……
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喜欢一切美好的东西
13楼2012-05-03 16:59:54
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imbest110

银虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zgb1982 at 2012-05-03 10:10:37:
如果酶切位点不合适就直接设计带有合适酶切位点的引物PCR就行了，不需要酶切了。

我直接设计的引物但是克隆出来的是质粒全部的DNA 估计是滚环复制的原因
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天道酬勤！
14楼2012-05-06 10:46:15
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imbest110

银虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by hyacinth326 at 2012-05-03 10:34:26:
有序列的话直接设计引物扩增就可以了，当然如果有合适的酶切位点也可以用，个人意见是pcr扩增

我直接设计的引物但复制出来的却和目的片段大小差距很大 求解
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天道酬勤！
15楼2012-05-06 10:47:07
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引物错配率比较高，引起非特异性扩增了吧。。。
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16楼2012-05-07 09:03:41
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