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zgb1982

木虫 (正式写手)

imbest110: 回帖置顶 2012-05-06 10:45:18
如果酶切位点不合适就直接设计带有合适酶切位点的引物PCR就行了,不需要酶切了。
11楼2012-05-03 10:10:37
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

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★ ★ ★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-03 13:49:00
imbest110: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-06 10:44:56
有序列的话直接设计引物扩增就可以了,当然如果有合适的酶切位点也可以用,个人意见是pcr扩增
12楼2012-05-03 10:34:26
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mdtdtao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
imbest110: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-06 10:45:09
不需要酶切,直接设计好引物PCR就好了,而且这种以质粒为模板的克隆,成功概率相当高的……
喜欢一切美好的东西
13楼2012-05-03 16:59:54
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imbest110

银虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by zgb1982 at 2012-05-03 10:10:37:
如果酶切位点不合适就直接设计带有合适酶切位点的引物PCR就行了,不需要酶切了。

我直接设计的引物但是克隆出来的是质粒全部的DNA 估计是滚环复制的原因
天道酬勤!
14楼2012-05-06 10:46:15
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imbest110

银虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by hyacinth326 at 2012-05-03 10:34:26:
有序列的话直接设计引物扩增就可以了,当然如果有合适的酶切位点也可以用,个人意见是pcr扩增

我直接设计的引物但复制出来的却和目的片段大小差距很大 求解
天道酬勤!
15楼2012-05-06 10:47:07
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引物错配率比较高,引起非特异性扩增了吧。。。
16楼2012-05-07 09:03:41
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