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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR引物TM值的确定
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zyk5113038

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-29 17:21:44
两条引物为什么差这么多，一般差三度以内为最好，选择较低的温度再减去5度左右，如果有条带则0.5到1度的网上增加。
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11楼2012-04-28 16:41:25
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我是小纯洁

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
组氨酸标签不在基因组上吧？
如果不在的话，那就按照去除标签后剩下的序列算TM值。
不知道我理解的对不对
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12楼2012-04-29 00:33:53
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快乐由自己go

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 有道理！头像的杯子很帅，O(∩_∩)O哈哈~ 2012-04-29 17:23:14
理论上，计算引物Tm值时不考虑另外引入的标签序列或者酶切位点序列等，建议重新计算下下游引物的Tm，然后取两条引物中较低Tm值。退火温度大概等于较低Tm-5。同时建议做Ta值的梯度优化实验来找到最佳Ta。
希望能有用。
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13楼2012-04-29 01:44:25
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魍魉人生

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励新虫 2012-04-29 17:22:02
你这差的也太多了吧，你可以跑下梯度，我个人觉得这个引物的设计有问题
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14楼2012-04-29 07:42:24
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