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cpumantiszj

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jcinta-MS: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-04-20 08:19:39
楼主能否说明下取血的方法?取血的方式,手法的熟练程度,更可能决定你的溶血程度。我觉得离心转速确实偏高,基本6000rpm足够了。另外,建议用肝素抗凝。
11楼2012-04-19 10:55:23
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xull19860419

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们使用的是5000,10min,4度
12楼2012-04-19 15:25:01
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jcinta-MS

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by xpkb at 2012-04-18 20:18:00:
一般是4000转10分钟,一般用肝素抗凝,离心比较彻底

好像用肝素的人还是占多数。。。。
13楼2012-04-20 08:17:21
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jcinta-MS

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by jonathonswq at 2012-04-19 09:26:42:
溶血可能压根和转速就没有关系,我以前取血浆用过15.4*1000g的转速,如果出现了溶血建议看一下离心温度,如果别人用的时候设定温度为4度什么的,低温很容易造成溶血的。

我们是4°离心呢。。。
14楼2012-04-20 08:17:42
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jcinta-MS

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by cpumantiszj at 2012-04-19 10:55:23:
楼主能否说明下取血的方法?取血的方式,手法的熟练程度,更可能决定你的溶血程度。我觉得离心转速确实偏高,基本6000rpm足够了。另外,建议用肝素抗凝。

直接断头取血,肝素和EDTA有啥区别呢?
15楼2012-04-20 08:19:16
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jonathonswq

木虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by jcinta-MS at 2012-04-20 08:19:16:
直接断头取血,肝素和EDTA有啥区别呢?

断头取血要尽量避免沾染毛发,否则肯定溶血的,如果是小鼠可能采用摘眼球取血,样品会相对干净些。
面对滇池,背靠西山,听龙门风雨,看海梗海鸥飞翔。
16楼2012-04-20 10:42:30
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cpumantiszj

木虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by jcinta-MS at 2012-04-20 08:19:16:
直接断头取血,肝素和EDTA有啥区别呢?

肝素毕竟是生物来源的杂多糖,其抗凝效果以及对血成分的保护肯定是最优的,具体原理其实我也不懂。但是这位朋友,肝素也不贵,EDTA只是一个小分子金属离子螯合剂,效果毕竟要差点,如果你非得刨根问底的知道区别在哪,我真的不懂。如果你 不是做机理方面,没必要为这个钻牛角尖,要你掌握的科研思路 新文献 实验技能改进方面事情太多了,时间花在更重要的方面吧。另外断头取血,铡刀下手一定要快(安全前提下,别因不熟练又一味求快铡破了手,熟能生巧吧)。买些肝素化的毛细管,眼眶取血,或者直接摘眼球取血,效果可能更好,得到的血量也更多。
17楼2012-04-20 23:19:49
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cxc268

金虫 (正式写手)

先肝素抗凝,血浆样品一般是2500-3000rpm,离心5-10min,可以用甲醇沉淀蛋白
疯狂的双子座
18楼2012-04-22 16:11:32
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酷闪

铜虫 (初入文坛)

还有这个与离心机的半径有关,小离心机,在同样转速、半径小的情况下,离心力小,所以也不能为3500,这样太小,可以设为6000.
做真正的自己!!!
19楼2012-04-22 22:10:05
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jcinta-MS

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
17楼: Originally posted by cpumantiszj at 2012-04-20 23:19:49:
肝素毕竟是生物来源的杂多糖,其抗凝效果以及对血成分的保护肯定是最优的,具体原理其实我也不懂。但是这位朋友,肝素也不贵,EDTA只是一个小分子金属离子螯合剂,效果毕竟要差点,如果你非得刨根问底的知道区别 ...

说的很有道理~
20楼2012-04-23 21:57:16
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