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chibang1220

木虫 (著名写手)

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[求助] 基因顺序重排怎么做？

我现在有一个产物需要4个基因才能合成，并且这4个基因在一起，形成一个基因簇。现在我想把这4个基因（标记为ABCD)顺序改变，怎么做啊？

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人的差别在于业余时间

1楼2012-04-16 10:58:39

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dmzha

铁杆木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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chibang1220: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-04-18 11:04:48
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 恩，鼓励提供有价值的应助哦 2012-04-18 17:20:08

首先，以你需要的顺序融化PCR扩增ABCD四个基因；
其次，PCR扩增该基因簇两端的同源臂（1000 bp左右）；
再次，将同源臂与你扩增的ABCD四个基因（顺序改变的）酶连起来，再连入自杀质粒中构建同源重组质粒；
最后，将同源重组质粒转化到你的菌株中，筛选获得ABCD基因顺序改变的菌株。

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2楼2012-04-18 10:38:19

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chibang1220

木虫 (著名写手)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by dmzha at 2012-04-18 10:38:19:
首先，以你需要的顺序融化PCR扩增ABCD四个基因；
其次，PCR扩增该基因簇两端的同源臂（1000 bp左右）；
再次，将同源臂与你扩增的ABCD四个基因（顺序改变的）酶连起来，再连入自杀质粒中构建同源重组质粒；
最 ...

嗯，谢谢你，我已经有思路了，不过我会采纳你的方法的，十分感谢啊