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扫描电镜样品预处理问题。。。 已有1人参与
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小女子第一次做扫描电镜，准备看菌丝的侵染过程。看了protocol后还很是迷茫。。。我们电镜室要求样品要先固定完，梯度脱水完再送过去。 那么1、固定用的2.5%戊二醛必须要用电镜专用的吗？分析纯的可以吗? 2、用戊二醛固定时，有人告诉我要抽真空。但我们实验室没有那个真空泵。人家又告诉我可以用针筒慢慢抽，请问如果用针筒会不会对菌丝形态造成破坏。。。还有，要抽到什么程度才算是固定完成？ 3、梯度脱水（乙醇）时，浓度梯度间隔一般是多少？操作时就是直接丢到乙醇里十五分钟到半个小时再捞出来再丢到下一个梯度的乙醇里就可以了吗？ 谢谢各位虫子！！！！ |
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木有人应助哇 2楼2013-02-14 22:32:11
xintutiao
金虫 (小有名气)
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- 专业: 环境微生物学
【答案】应助回帖
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laozuzunzhe: 金币+5, good! 2013-02-23 11:14:11
laozuzunzhe: 金币+5, good! 2013-02-23 11:14:11
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楼主不必过于担心 微生物的固定其实很简单 戊二醛就是很好的固定剂 不过我有一个疑问 一般实验室常买的戊二醛都是25%的水溶液 不知楼主所说是不是这种情况 建议楼主先配一瓶0.2M 磷酸盐缓冲液 （ph=7）取50ml缓冲液 加上10ml 25%的戊二醛水溶液 用DI water加到总体积为100ml 此时楼主即可得到0.1M 2.5%的戊二醛固定计了 把你的样品放到固定剂里 静置4h 就行了 或者放到4°冰箱过夜 到时间后取出 再用磷酸也缓冲液淋洗3次 再依次放入 30% 40 % 50% 60% 70% 80% 90 % 100% 的乙醇水溶液中 在每个溶液中静止30min 就完成了梯度脱水（ ps 我有时时间紧只待20min 觉得效果也不错） 这样楼主的预处理就做完了 拿到扫描电镜那里 后续的干燥和喷金都交给他们来完成啦~ |
3楼2013-02-22 22:40:46
【答案】应助回帖
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你好，小白求教很基础的问题，，样品清洗固定脱水都用离心管，是吧？必须用玻璃离心管么，塑料的可以么？ 后面的干燥，是不是要放在载玻片上啊？还是玻璃培养皿之类的…莫笑 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-07-31 16:35:52
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