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七八月的阳光

铜虫 (初入文坛)


[交流] 用Trinity进行de novo拼装

最近在公司做了转录组测序,植物样本,illumina Hiseq2000,三个样本共100M的clean reads,一起拼接。该公司用Trinity软件进行de novo拼接,拼出来contigs达40多万条,后来又用CD-HIT进行聚类,结果仍有30多万条,其中包含很多转录本的存在。从文献中看一般植物转录组de novo拼接也就几万条序列,太多的转录本会影响到后面表达量的比较。不知道是由于Trinity这个拼接软件的原因还是其他什么原因。
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七八月的阳光

铜虫 (初入文坛)


引用回帖:
4楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-04-12 08:26:10:
我个人感觉是你的测序深度太小,而不是软件的问题,即便把其他的拼接软件都用一遍,也不会有什么明显改善。
如果你想把contig尽量拼好一点,进行项目的时候就应该和公司讨论好。才100M的reads,不够的。看看文献 ...

我看很多植物的文章里面也就是几十M的reads。
主要前期看的文献比较少,开展实验的时候时间比较仓促,到现在拿到数据进行结果分析的时候就开始头疼了。
因为后面还想直接比一下三个样本基因表达的差异,就怕转录本太多会干扰表达量结果。主要还是因为没有经验和背景知识比较缺乏。
先做做看好了。
5楼2012-04-12 09:33:09
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gaoyang636

木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
植物的基因组多大呢?
contig的N50有多少?
2楼2012-04-11 16:50:53
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七八月的阳光

铜虫 (初入文坛)


引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-04-11 16:50:53:
植物的基因组多大呢?
contig的N50有多少?

不知道呢,可能很大,有90多条染色体。
选取的contig为200bp以上,N50为558
不知道是不是和多倍体重复基因有关系
第一次发金币,发出去了吗?
3楼2012-04-11 16:57:55
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gaoyang636

木虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhaohq1209: 金币+4, 学习了~欢迎继续交流哈 2012-04-13 11:28:17
我个人感觉是你的测序深度太小,而不是软件的问题,即便把其他的拼接软件都用一遍,也不会有什么明显改善。
如果你想把contig尽量拼好一点,进行项目的时候就应该和公司讨论好。才100M的reads,不够的。看看文献上的测序量有多少?
不过转录组本来也不要求拼长,直接去比对也可以的。你如果是觉得contig太多,就过滤一下吧,比如,选400bp以上的?
4楼2012-04-12 08:26:10
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