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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 原位杂交探针设计及实验步骤
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qqwang8706

新虫 (初入文坛)

[求助] 原位杂交探针设计及实验步骤

各位虫友，小弟最近一直在做原位杂交，不过信号一直都没有出来，不清楚是什么问题导致，想与各位讨论下
（1）我怀疑是探针设计没有设计好，我用的是oligo设计，探针是36bp，之前设计参照了一些文献所报道的，然后自己设计，然后探针设计的原理一直不是很清楚的，各位虫友多指教下
（2）是不是我实验方法的问题，也一直存在疑问，我是检查病原菌在组织中的分布，之前实验室有人用相同的方法做出来，而我一直没有做出来，很纳闷
（3）因为我是检测病原菌是不是有可能病原菌在组织中的分布很少，但是我是现做的是石蜡组织，而且我从感染宿主中已经分离到了病原菌了。
希望各位虫友能够给我分析一下，感激不尽!
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1楼 2012-04-11 16:31:58
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若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有目标基因没有检测出来 那就是探针没有设计好的缘故了。原位杂交的探针设计比较重要，需要设计多条，GC含量不能高，最好不要有3个以上连续的相同碱基，还有探针对应基因的区域位置
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2楼2012-04-11 16:47:24
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qqwang8706

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 若水5886 at 2012-04-11 16:47:24:
有目标基因没有检测出来 那就是探针没有设计好的缘故了。原位杂交的探针设计比较重要，需要设计多条，GC含量不能高，最好不要有3个以上连续的相同碱基，还有探针对应基因的区域位置

谢谢你的回复，不知可否进一步指导一下？？？谢谢！！
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3楼2012-04-11 18:50:59
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