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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒快检出现特异亮带，求解。
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zhsDONG

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒快检出现特异亮带，求解。

在质粒快检时，在1500bp和900bp出出现特异性亮带，我的目的质粒出现在3200bp处。

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1楼 2012-04-11 09:46:22
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超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-11 13:53:32
zhsDONG: 金币+1, ★有帮助 2012-04-11 15:05:25
特异性条带是指你自己的目的条带，而且没有其它杂带，这叫特异性条带。你这1500bp和900bp出现的亮带不是你自己的目的条带吧？觉得你这个样品比较杂乱，有蛋白质污染也有基因组污染，虽然是快速鉴定，但这个也有点粗糙了。而且marker条带太弱，貌似条带还超出了marker范围。
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2楼2012-04-11 10:58:12
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-04-11 13:53:42
楼主的质粒没有提好，泳道最下方有smear, 分子量最高带下方还有杂带。
正常质粒是闭合的双链DNA, 在电泳过程中可能使质粒发生开环，或者由开环解开螺旋变成线形。这三种形态电泳时，分成三带。
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3楼2012-04-11 12:30:16
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zhsDONG

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2012-04-11 12:30:16:
楼主的质粒没有提好，泳道最下方有smear, 分子量最高带下方还有杂带。
正常质粒是闭合的双链DNA, 在电泳过程中可能使质粒发生开环，或者由开环解开螺旋变成线形。这三种形态电泳时，分成三带。

我这是质粒快检胶照片，没有提质粒。
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4楼2012-04-11 15:04:41
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若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流！我也觉得像RNA的带。 2012-04-11 20:45:09
快检的时候会出现染色体条带，质粒条带以及RNA条带。你这个下面的是不是RNA条带呢？
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5楼2012-04-11 16:33:14
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 专家考核, Good！ 2012-04-11 20:45:23
质粒快检并不能说明太大问题。。。只是一个粗略的方法。。。
还需要大量提取质粒，进行酶切等后期验证。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2012-04-11 19:07:42
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zhsDONG

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 若水5886 at 2012-04-11 16:33:14:
快检的时候会出现染色体条带，质粒条带以及RNA条带。你这个下面的是不是RNA条带呢？

我也怀疑是RNA条带，但老板和师兄们都说在常规电泳时RNA很快就降解了。如果是RNA ，1500bp可解释为16SrRNA ，那900bp处是哪一种哪？
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7楼2012-04-12 20:28:28
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zhsDONG

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 若水5886 at 2012-04-11 16:33:14:
快检的时候会出现染色体条带，质粒条带以及RNA条带。你这个下面的是不是RNA条带呢？

我也在验证是不是RNA !
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8楼2012-04-12 20:31:25
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我是小纯洁

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, Good！ 2012-04-12 23:49:58
应该是RNA。抽提出来的东西，从图的上方到下方，依次是：基因组DNA，质粒，28sRNA，18sRNA.
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9楼2012-04-12 23:22:20
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若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by zhsDONG at 2012-04-12 20:28:28:
我也怀疑是RNA条带，但老板和师兄们都说在常规电泳时RNA很快就降解了。如果是RNA ，1500bp可解释为16SrRNA ，那900bp处是哪一种哪？

RNA正常有3条带，但是最下面的经常会看不到的
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10楼2012-04-13 09:18:03
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