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坤坤june

金虫 (正式写手)

[交流] 精油抑菌试验MIC怎么测定啊？求高手指点

我现在在做精油对大肠杆菌的抑菌试验，由于精油是油性的，易挥发，我尝试用吐温-80乳化后稀释和石油醚两种不同方法稀释，然后用滤纸片法和杯碟法对最小抑菌浓度（MIC）进行测定，重复了很多次可是试验结果都不理想，请大家帮忙分析一下原因：
①滤纸片法做出来的抑菌圈奇形怪状的，大小没有规律，边缘不整齐。有时候抑菌圈内还会均匀的长一些单菌落。抑菌圈的大小也不是和精油的浓度成正比，有的浓度小的抑菌圈反而大。（我是将6mm滤纸片泡在精油不同的稀释液中几分钟，然后将纸片在精油溶液的瓶口稍微沥干溶液，然后贴在涂布好菌液的培养平板上，刚贴上的时候滤纸片的周围精油扩散到很好，形状很圆，可是培养完成后的抑菌圈会变成不同的形状，愁啊，不知道怎么回事）
②而杯碟法不知道为什么都没有抑菌圈，我是按照微生物实验指导书中的操作步骤做的，先倒一层无菌培养基然后一层含大肠杆菌的培养基，牛津杯中加入200微升的精油稀释液。培养后菌层长的还不错，就是所有的浓度都没有抑菌圈。
请各位高手指点迷津啊，我不知道错在哪里了？做抑菌试验有其他的好方法吗？
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1楼 2012-04-08 14:32:39
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by 坤坤june at 2012-04-09 12:28:17:
您好，你说的膜过滤除菌用的膜具体叫什么啊？我刚开始做实验什么都不懂，嘿嘿，见笑啦。那个膜对油性的东西或有机溶剂的过滤效果好吗？我用的滤纸片是放在密封的铝盒里121度灭菌的，抑菌圈里长的零星菌落看起来是 ...

刚刚仔细看了下 你的是抑菌圈里面长单菌落，刚开始以为是在滤纸片上长单菌落呢。那就应该过膜就没必要了，我是没碰到过那种情况，你换种大肠或别的菌试一试是不是还长单菌落
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9楼2012-04-10 11:13:08
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
坤坤june: 金币+1 2012-04-09 12:28:41
本帖仅楼主可见
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2楼2012-04-08 20:51:18
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chenyyy

无虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
坤坤june: 金币+1 2012-04-09 12:28:46
请参看    药理实验方法学    其中规定怎么做的很详细
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3楼2012-04-08 22:15:45
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
坤坤june: 金币+5 2012-04-09 12:16:20
这个实验以前做过抑菌先谈下自己实验的经验
1.MIC不光与你要做的物质特性有关，还与很多东西有关，比如重要的，你的指示菌的浓度，琼脂的含量
2.操作过程要在灭过菌的超净台进行，你刚开始说的那个滤纸片长菌，估计是没控制好过程中染菌的可能，你那样浸泡就拿出来，精油中都可能有菌。以前我们是把滤纸片什么的灭好菌，放在琼脂上，然后用0.22的膜过滤一定量的试剂滴在滤纸片上，你说的抑菌圈不规则可能于滤纸片不圆或者平板琼脂没倒好有关，或者你说的滤纸长菌肯定会影响抑菌圈的形状
3.这种方法适合测MIC吗？MIC是最小抑菌浓度吧，抑菌圈多大算是最小抑菌浓度？建议用测OD吸光度做这个实验
4.刚刚看了上面的回复，对精油的特性不太了解，可能实验还有别的注意的地方

[ Last edited by xzx018 on 2012-4-9 at 10:00 ]
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4楼2012-04-09 09:57:25
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