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坤坤june

金虫 (正式写手)


[交流] 精油抑菌试验MIC怎么测定啊?求高手指点

我现在在做精油对大肠杆菌的抑菌试验,由于精油是油性的,易挥发,我尝试用吐温-80乳化后稀释和石油醚两种不同方法稀释,然后用滤纸片法和杯碟法对最小抑菌浓度(MIC)进行测定,重复了很多次可是试验结果都不理想,请大家帮忙分析一下原因:
①滤纸片法做出来的抑菌圈奇形怪状的,大小没有规律,边缘不整齐。有时候抑菌圈内还会均匀的长一些单菌落。抑菌圈的大小也不是和精油的浓度成正比,有的浓度小的抑菌圈反而大。(我是将6mm滤纸片泡在精油不同的稀释液中几分钟,然后将纸片在精油溶液的瓶口稍微沥干溶液,然后贴在涂布好菌液的培养平板上,刚贴上的时候滤纸片的周围精油扩散到很好,形状很圆,可是培养完成后的抑菌圈会变成不同的形状,愁啊,不知道怎么回事)
②而杯碟法不知道为什么都没有抑菌圈,我是按照微生物实验指导书中的操作步骤做的,先倒一层无菌培养基然后一层含大肠杆菌的培养基,牛津杯中加入200微升的精油稀释液。培养后菌层长的还不错,就是所有的浓度都没有抑菌圈。
请各位高手指点迷津啊,我不知道错在哪里了?做抑菌试验有其他的好方法吗?
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坤坤june

金虫 (正式写手)


引用回帖:
2楼: Originally posted by chlijun at 2012-04-08 20:51:18:
1、我认为精油具有挥发性,就应该测定它的熏蒸抑菌作用,我们在测定精油对真菌的抑制作用时一般用对扣法,即真菌在培养皿底、精油在培养皿盖上,然后封口膜密封。
2、你提到的精油稀释,我们以前也做过,感觉不能 ...

我会考虑熏蒸抑菌作用的,非常感谢。
5楼2012-04-09 12:10:20
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查看全部 22 个回答

匿名

用户注销 (正式写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
坤坤june: 金币+1 2012-04-09 12:28:41
本帖仅楼主可见
2楼2012-04-08 20:51:18
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chenyyy

无虫 (正式写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
坤坤june: 金币+1 2012-04-09 12:28:46
请参看    药理实验方法学    其中规定怎么做的很详细
3楼2012-04-08 22:15:45
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
坤坤june: 金币+5 2012-04-09 12:16:20
这个实验以前做过抑菌先谈下自己实验的经验
1.MIC不光与你要做的物质特性有关,还与很多东西有关,比如重要的,你的指示菌的浓度,琼脂的含量
2.操作过程要在灭过菌的超净台进行,你刚开始说的那个滤纸片长菌,估计是没控制好过程中染菌的可能,你那样浸泡就拿出来,精油中都可能有菌。以前我们是把滤纸片什么的灭好菌,放在琼脂上,然后用0.22的膜过滤一定量的试剂滴在滤纸片上,你说的抑菌圈不规则可能于滤纸片不圆或者平板琼脂没倒好有关,或者你说的滤纸长菌肯定会影响抑菌圈的形状
3.这种方法适合测MIC吗?MIC是最小抑菌浓度吧,抑菌圈多大算是最小抑菌浓度?建议用测OD吸光度做这个实验
4.刚刚看了上面的回复,对精油的特性不太了解,可能实验还有别的注意的地方

[ Last edited by xzx018 on 2012-4-9 at 10:00 ]
4楼2012-04-09 09:57:25
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