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肝素前体heparosan亚硝酸裂解法制二糖GlcA-AnMan
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各位朋友，小虫最近在做一个二糖的合成，葡萄糖醛酸-2,5-脱水甘露醇（GlcA-AnMan，其分子量约340），原料是发酵制得的肝素前体（heparosan）,用化学方法反应制备（亚硝酸裂解法），现在对于此二糖的分离纯化和检测方面有诸多不懂，望对糖类有研究的虫友们可以多多指教。 我要合成的二糖买不到标准品，文献上对此二糖也没有多少说明。对于其在醇溶液中的溶解度不是很清楚，是否有紫外吸收也不晓得。（不过猜想可能有，因为有糖醛酸结构） 实验方案是合成反应完后将反应液先过DEAE柱粗分纯化，紫外280nm检测，将属于同一峰型的洗脱液合并，再将合并后的洗脱液浓缩后过Sephadex G25脱盐分离，也是紫外280nm检测收集，最后也是将属于同一峰型的洗脱液合并蒸发浓缩后冻干。 已经做完一次预实验了，中间出现许多问题，现列出来求赐教。 一、分离纯化 1.过DEAE柱之前是否需要加一步骤先除盐呢，看资料说DEAE填料是低盐吸附，高盐洗脱，想问下能否不除盐呢，直接把反应液稀释n多倍，使其盐浓度非常小，这样经过DEAE柱时反应液中的盐应该不会被柱子吸附了吧。 2.如果必须除盐的话，自己想出的方法有1、乙醇分级沉淀法，加入乙醇使反应液成不同的纯浓度而使糖析出，但是不清楚我的目标二糖在醇溶液中的溶解度怎样，觉得会比较繁琐。2、蒸发结晶，随着水分的减少盐应该会优先析出，然后离心取上清液再过DEAE柱，此法蒸发量不确定，担心把糖也一并析出来。请问各位有什么较好的方法么？ 3.因为我的目标二糖分子量只有340，除盐的话相差还不到一个数量级，而裂解过程中也可能产生四糖、六糖、八糖、十糖等其他低分子寡糖，我使用Sephadex G25试过一次，分离效果并不好，请问此操作有没有什么需要注意的地方，如使用更长点的柱子（自己用的柱子是1.6*50cm），上样量再少点(试过1ml，但效果不好)，分离效果会不会要好些呢？还有其他比较好的方法么？ 二、检测 我是紫外280nm检测的，我的原料紫外扫描过知道在此波长处是有吸收的，但是我的二糖因为没有标准品，其实在此波长有没有吸收心里是没底的，只是从结构分析二糖和原料相似，猜想可能有的。还有一个问题是我的反应试剂用到了NaNO2，此试剂在280nm处也是有吸收的，因而这个检测方法始终觉得有点悬。想过改进检测方法1、用苯酚硫酸法测每管洗脱液的吸光度，以此代替可疑的280nm处吸光度2、使用液相糖柱-示差检测每管洗脱液以确定同一物质的洗脱液然后合并。这种方法又涉及糖柱的选择了，对此一窍不通，而且做液相没有标准品感觉很麻烦的，还望有懂的可以不吝赐教。  heparosan  GlcA-AnMan |
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