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小猫三两只

金虫 (正式写手)

[交流] 5-RACE

最近要开始做RACE，以前做过3端，很好做，但5端一直做不出来，请问做5端的时候有哪些注意事项
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1楼 2012-03-30 16:15:38
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)
★
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不好做额，我做了两三个月了，是做单细胞的5-race，让人崩溃了
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2楼2012-03-30 16:41:41
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wtyyyyy1988 at 2012-03-30 16:41:41:
不好做额，我做了两三个月了，是做单细胞的5-race，让人崩溃了

是啊，5－RACE费时费力，还不容易成功！
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3楼2012-03-30 16:43:32
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
假如是买试剂盒做的话，我感觉就是看个人的运气了
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4楼2012-03-30 16:59:06
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lucheng123

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不知lz买的试剂盒是什么的？我用的clotech的还是比较好做，预测一下长度，延伸时间适当调整一下
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5楼2012-03-30 20:00:18
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ding218

木虫 (正式写手)
★
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用盒子吧，5RACE很难做。
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6楼2012-03-30 22:54:34
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wmq682

金虫 (正式写手)
★
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用盒子做，核酸质量好些，按照试剂盒的要求，扩增片段不要太大了，很好做的
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7楼2012-03-31 08:06:11
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wtyyyyy1988 at 2012-03-30 16:59:06:
假如是买试剂盒做的话，我感觉就是看个人的运气了

实验不能只靠运气来做吧，我想知道在做的过程中要注意哪些，5RACE的过程很复杂，可能在做的过程中会出现一些小问题
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8楼2012-03-31 09:04:41
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lucheng123 at 2012-03-30 20:00:18:
不知lz买的试剂盒是什么的？我用的clotech的还是比较好做，预测一下长度，延伸时间适当调整一下

以前用的是TAKARA的，5RACE的片段比较短，但也没出来，现在这个基因3000多，5RACE有400－500bp左右吧，估计就更不好做了
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9楼2012-03-31 09:06:05
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wmq682 at 2012-03-31 08:06:11:
用盒子做，核酸质量好些，按照试剂盒的要求，扩增片段不要太大了，很好做的

请问你是用哪公司的盒子，完全按照说明书上做的吗，有没有什么技巧啊，希望能分享你的经验，谢谢！
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10楼2012-03-31 09:07:25
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heroyl

木虫 (正式写手)
★
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仔细一点，按试剂盒说明书小心操作，我用TAKARA的做出过1000左右的。
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11楼2012-03-31 09:51:18
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
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不好做，做了三个月没成，后来用genome walk从DNA拿到序列，然后从RNA拿全长。
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12楼2012-03-31 12:56:53
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12345123456

捐助贵宾 (正式写手)
★
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注意的太多了，。稍有不慎就失败。
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13楼2012-04-10 15:02:10
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dongfang12

铜虫 (小有名气)
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12楼: Originally posted by stone2239 at 2012-03-31 12:56:53:
不好做，做了三个月没成，后来用genome walk从DNA拿到序列，然后从RNA拿全长。

我也做5’RACE 好几个月，一直没结果，拖带，点样孔亮，没条带，郁闷死了
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14楼2012-05-17 22:08:25
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by dongfang12 at 2012-05-17 22:08:25:
我也做5’RACE 好几个月，一直没结果，拖带，点样孔亮，没条带，郁闷死了

唉，我还算幸运，基因没有内含子，总算得到了全长。加油！
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15楼2012-05-18 01:57:54
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dongfang12

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
15楼: Originally posted by stone2239 at 2012-05-18 01:57:54:
唉，我还算幸运，基因没有内含子，总算得到了全长。加油！

天啦，请教你的5‘RACE 怎么做出来的？
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16楼2012-05-18 18:29:50
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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16楼: Originally posted by dongfang12 at 2012-05-18 18:29:50:
天啦，请教你的5‘RACE 怎么做出来的？

我的基因5'端不是用RACE法得到的，是用TAIL-PCR法，根据核心序列设计三条特异引物，用DNA做模板，用Genome walk试剂盒做的，得到5'端后，拼接出全长，然后再设计全长引物，分别用cDNA、基因组DNA为模板扩全长验证。
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17楼2012-05-19 11:28:06
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yananhl

银虫 (小有名气)
★
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12楼: Originally posted by stone2239 at 2012-03-31 12:56:53
不好做，做了三个月没成，后来用genome walk从DNA拿到序列，然后从RNA拿全长。

用genome walk可以最后拿到5‘端吗？怎么做到？
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18楼2012-07-15 12:34:54
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