应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Amp、IPTG和X-gal的使用
52/1返回列表
查看: 4607  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

华俊

金虫 (小有名气)

[求助] Amp、IPTG和X-gal的使用

Amp、IPTG使用灭菌水配制后和X-gal使用二甲基甲酰胺（DMF）配制后放在-20度保存，分别能保存多久呀？
还有就是大家在使用这两种试剂是涂板的时候和菌液一起加入还是在倒平板的时候就加入培养基呢，使用浓度和使用量分别是多少呢？培养过夜后蓝白斑显色不明显，为什么放4度3--4小时后显色会比较好呢？我使用AMP的终浓度是100微克/毫升，但是感觉还是长很多杂菌，有没有同学尝试用更高浓度去筛选？
谢谢各位大侠的帮助啦！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
多一份快乐少一分烦恼！
1楼 2012-03-30 11:04:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

路人甲007

木虫 (正式写手)

小七
引用回帖:
11楼: Originally posted by wurenzhi0721 at 2012-04-01 09:30:46:
是啊，就是大牛啊，这篇文章“Protein production by auto-induction in high-density shaking cultures”发表在Protein Expression and Purification（IF 1.6左右），不过引用次数达到1111，还有其他文章引用次 ...

呵呵，貌似坛子里知道他的人很少，还有很多人还在用IPTG诱导摸索条件，我就曾经为了表达一组蛋白摸索了几个月的条件，前车之鉴啊，不过也学到了很多东西。studier这个人做原核表达应用方面是我们的先驱，真的是便捷了我们，他发明了自诱导系统就是为了让我们的表达更加便捷，而且我们实验室经过实践确实好用。
还是希望广大科研学者使用这个吧，还省了买IPTG呢
赞一下 回复此楼
与人玫瑰手有余香
12楼2012-04-01 09:35:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

bingdong05

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
华俊: 金币+5, ★★★很有帮助, 1 2012-03-30 11:40:23
amp100微克/毫升，其实你可以试着提高下浓度，我曾经加错一倍，结果照样能长出来，倒平板时加入，前提培养基冷却至50度左右，另外不需要蓝白筛选的，其实挑转化子的时候多挑几个，一般没有问题，但是不知道你的DH5a等感受态是买的还是自己做的，我试过商业化的，不同批次的差别很大，不如自己做的
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-30 11:21:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

华俊

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bingdong05 at 2012-03-30 11:21:49:
amp100微克/毫升，其实你可以试着提高下浓度，我曾经加错一倍，结果照样能长出来，倒平板时加入，前提培养基冷却至50度左右，另外不需要蓝白筛选的，其实挑转化子的时候多挑几个，一般没有问题，但是不知道你的DH ...

谢谢啦，我也在考虑提高氨苄的浓度来做做，DH5a转化效率比较高，这个我知道，一次就成功啦，但是我现在做的是蛋白表达，要把连接产物转化到DE3系列的表达菌种，遇到了难题啦，转化后板上也长很多菌，可是挑菌摇菌，表达就是不成功，前面有同学做过这个实验，目的片段可能不会有问题的，酶切、测序都正确，现在我怀疑是表达感受态的问题了.....想换种方式筛选
赞一下 回复此楼
多一份快乐少一分烦恼！
3楼2012-03-30 11:48:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

路人甲007

木虫 (正式写手)

小七
简单的方法就是做完转化后做一轮菌落PCR，这可以初步筛选阳性克隆，然后选取阳性克隆送测序，保证目的基因正确插入之后才能进行后续表达。

蓝白斑筛选也会有假阳性和假阴性的结果的，本来就不是很准确，这种方法我也用过。
赞一下 回复此楼
与人玫瑰手有余香
4楼2012-03-30 13:57:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +12 Ldrop2023 2026-08-13 13/650 2026-08-17 12:33 by gltch
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 3/150 2026-08-17 09:49 by xLVPIRuSvCUe
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭