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elaine596

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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-03-31 09:38:32

260/280比值较低可能是因为RNA的浓度低，电泳检测一下，如果纯度还可以的话是不影响RT-PCR的，毕竟模板量也不用太大。异丙醇沉淀时肉眼看不到沉淀也没关系，后面步骤都轻缓一些，最后加溶剂溶解的时候，可以少加些溶剂，这样浓度会大点，测浓度时楼主可以注意下260/280比值有没有因为浓度的增加而恢复正常！

12楼2012-03-30 08:57:44

hyacinth326

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西瓜: 金币+1, 有道理啊 2012-04-01 17:46:41

260/280比值低，而RNA的浓度又不低，这应该是蛋白含量高了吧，这个可能会影响到反转录的。

13楼2012-03-30 11:36:35

lwtong8320

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【答案】应助回帖

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楼主是用什么方法提的RNA, 不是试剂盒吗？我们提细菌的RNA一般用试剂盒的话(promega)，260/280在2.0左右，而且得到RNA的量也是够用的。

努力！努力！再努力！

14楼2012-03-30 13:23:21

ding218

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可以用，纯度不用太高，是不是做表达啊？

15楼2012-03-30 23:40:48

狼在身边

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引用回帖:

15楼: Originally posted by ding218 at 2012-03-30 23:40:48:
可以用，纯度不用太高，是不是做表达啊？

对啊，我想做相对表达，不知道这个纯度可以嘛！

16楼2012-03-31 20:09:03

ding218

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需要去DNA，各个样本的浓度最好一致，可以用内参基因标定。

17楼2012-04-01 06:53:29

狼在身边

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引用回帖:

14楼: Originally posted by lwtong8320 at 2012-03-30 13:23:21:
楼主是用什么方法提的RNA, 不是试剂盒吗？我们提细菌的RNA一般用试剂盒的话(promega)，260/280在2.0左右，而且得到RNA的量也是够用的。

我用的是TAKARA的试剂盒，提取的细菌RNA。我们实验室用同样的试剂盒做的组织的RNA纯度很好，细菌的好像都没有那么好。不知道为什么。

18楼2012-04-01 13:31:39

小小_木虫

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【答案】应助回帖

我是提阳性细菌RNA，不知道你的是什么细菌？之前用的TakaRa的 RNAiso Plus，由于技术不过关，总是降解的厉害，后来就换的天根的试剂盒，跑胶检测还可以，两条带很清晰，我觉得你可以试试。对于最后壁上没有沉淀，我觉得是不是破壁那步骤没有做好，导致根本就没有提出来，我第一次提的时候没有进行破壁就没沉淀。

新手交流～～～

19楼2013-02-26 16:58:02