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原野漫漫

禁虫 (小有名气)

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11楼2012-03-29 21:52:32
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elaine596

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-03-31 09:38:32
260/280比值较低可能是因为RNA的浓度低,电泳检测一下,如果纯度还可以的话是不影响RT-PCR的,毕竟模板量也不用太大。异丙醇沉淀时肉眼看不到沉淀也没关系,后面步骤都轻缓一些,最后加溶剂溶解的时候,可以少加些溶剂,这样浓度会大点,测浓度时楼主可以注意下260/280比值有没有因为浓度的增加而恢复正常!
12楼2012-03-30 08:57:44
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 有道理啊 2012-04-01 17:46:41
260/280比值低,而RNA的浓度又不低,这应该是蛋白含量高了吧,这个可能会影响到反转录的。
13楼2012-03-30 11:36:35
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lwtong8320

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主是用什么方法提的RNA, 不是试剂盒吗?我们提细菌的RNA一般用试剂盒的话(promega),260/280在2.0左右,而且得到RNA的量也是够用的。
努力!努力!再努力!
14楼2012-03-30 13:23:21
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ding218

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以用,纯度不用太高,是不是做表达啊?
15楼2012-03-30 23:40:48
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狼在身边

木虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by ding218 at 2012-03-30 23:40:48:
可以用,纯度不用太高,是不是做表达啊?

对啊,我想做相对表达,不知道这个纯度可以嘛!
16楼2012-03-31 20:09:03
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ding218

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

需要去DNA,各个样本的浓度最好一致,可以用内参基因标定。
17楼2012-04-01 06:53:29
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狼在身边

木虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by lwtong8320 at 2012-03-30 13:23:21:
楼主是用什么方法提的RNA, 不是试剂盒吗?我们提细菌的RNA一般用试剂盒的话(promega),260/280在2.0左右,而且得到RNA的量也是够用的。

我用的是TAKARA的试剂盒,提取的细菌RNA。我们实验室用同样的试剂盒做的组织的RNA纯度很好,细菌的好像都没有那么好。不知道为什么。
18楼2012-04-01 13:31:39
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小小_木虫

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我是提阳性细菌RNA,不知道你的是什么细菌?之前用的TakaRa的 RNAiso Plus,由于技术不过关,总是降解的厉害,后来就换的天根的试剂盒,跑胶检测还可以,两条带很清晰,我觉得你可以试试。对于最后壁上没有沉淀,我觉得是不是破壁那步骤没有做好,导致根本就没有提出来,我第一次提的时候没有进行破壁就没沉淀。新手交流~~~
19楼2013-02-26 16:58:02
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