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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于RT-PCR的众多细节
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原野漫漫

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
11楼2012-03-29 21:52:32
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elaine596

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-03-31 09:38:32
260/280比值较低可能是因为RNA的浓度低，电泳检测一下，如果纯度还可以的话是不影响RT-PCR的，毕竟模板量也不用太大。异丙醇沉淀时肉眼看不到沉淀也没关系，后面步骤都轻缓一些，最后加溶剂溶解的时候，可以少加些溶剂，这样浓度会大点，测浓度时楼主可以注意下260/280比值有没有因为浓度的增加而恢复正常！
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12楼2012-03-30 08:57:44
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 有道理啊 2012-04-01 17:46:41
260/280比值低，而RNA的浓度又不低，这应该是蛋白含量高了吧，这个可能会影响到反转录的。
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13楼2012-03-30 11:36:35
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lwtong8320

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主是用什么方法提的RNA, 不是试剂盒吗？我们提细菌的RNA一般用试剂盒的话(promega)，260/280在2.0左右，而且得到RNA的量也是够用的。
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努力！努力！再努力！
14楼2012-03-30 13:23:21
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ding218

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以用，纯度不用太高，是不是做表达啊？
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15楼2012-03-30 23:40:48
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狼在身边

木虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by ding218 at 2012-03-30 23:40:48:
可以用，纯度不用太高，是不是做表达啊？

对啊，我想做相对表达，不知道这个纯度可以嘛！
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16楼2012-03-31 20:09:03
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ding218

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

需要去DNA，各个样本的浓度最好一致，可以用内参基因标定。
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17楼2012-04-01 06:53:29
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狼在身边

木虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by lwtong8320 at 2012-03-30 13:23:21:
楼主是用什么方法提的RNA, 不是试剂盒吗？我们提细菌的RNA一般用试剂盒的话(promega)，260/280在2.0左右，而且得到RNA的量也是够用的。

我用的是TAKARA的试剂盒，提取的细菌RNA。我们实验室用同样的试剂盒做的组织的RNA纯度很好，细菌的好像都没有那么好。不知道为什么。
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18楼2012-04-01 13:31:39
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小小_木虫

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我是提阳性细菌RNA，不知道你的是什么细菌？之前用的TakaRa的 RNAiso Plus，由于技术不过关，总是降解的厉害，后来就换的天根的试剂盒，跑胶检测还可以，两条带很清晰，我觉得你可以试试。对于最后壁上没有沉淀，我觉得是不是破壁那步骤没有做好，导致根本就没有提出来，我第一次提的时候没有进行破壁就没沉淀。新手交流～～～
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19楼2013-02-26 16:58:02
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