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我是小纯洁

金虫 (正式写手)

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[求助] 摇菌怪事

AMP抗性。DH5a. 转化、涂板以后，菌落pcr有条带。amp液体培养基也能摇起来。但是提不出质粒，后经抽提核酸，得知，没有质粒被转入。

1.为什么菌落pcr能有条带，但却没有质粒？
2.为什么没有质粒，却能摇起来？

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1楼 2012-03-22 09:54:18

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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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amisking: 金币+3, MicEPI+1, 鼓励帮助解答问题！ 2012-03-22 18:44:52
我是小纯洁: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2012-03-23 21:48:39

1.菌落PCR假阳性的情况经常出现。这是由于转化所用的质粒或连接产物的浓度和总量都较高，导致平板表面有大量的PCR模板。lz可以尝试刮取平板上无菌落的地方来做PCR，也有相当一部分是阳性。

2.amp容易失效，且根据其抑菌原理，能产生卫星菌落。所以我在试验中一般都避免使用amp，如果使用浓度一般用150.