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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 高效液相色谱使用磷酸盐做流动相时应该注意什么
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sunmaocheng

铁虫 (小有名气)

[求助] 高效液相色谱使用磷酸盐做流动相时应该注意什么

柱子是C18，柱子内部是用纯乙腈封的，流动相准备用磷酸钾缓冲液，但是听说磷酸钾缓冲液与有机溶剂容易结晶，容易把机器和柱子堵塞，但是我不知道怎么避免堵塞现象的发生，请懂的人给予帮助。谢谢。
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Sunshine
1楼 2012-03-17 12:21:04
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caozhanglei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sunmaocheng: 金币+1, ★有帮助 2012-03-29 08:48:43
1.用前要用磷酸调PH值，使其达到所要求的PH值。
2.要现用现配，以免时间长缓冲盐析出和滋生细菌。
3.要一次配足，多次配的前后缓冲效果不一样，影响分离效果。
4.磷酸盐流动相尽量现用现配，不要存放太久，如果晶体析出，会严重损坏柱子和泵内的密封垫圈，还有柱塞杆。
5.流动相溶剂应选择hplc的溶剂或依此为标准的溶剂。流动相使用前用0.45μm滤膜过滤、脱气，清除微粒和灰尘。 在送液泵内，为了防止杂物（固体）进入流路，装有吸滤器，但网孔径为10μm，比此更小的颗粒仍然可通过，这会导致流路和柱子堵塞和污染。为此，建议常用0.45μm滤膜过滤。流动相溶剂须经脱气，如不脱气，在溶剂混合时，或压力温度变化时容易产生大量气泡，会导致泵误动作和输液不畅，检测器产生噪声信号等。
6.流动相恢复到室温后使用。流动相温度与室温相差时，流动相在恢复到室温前，基线水平很难稳定，特别是发生漂移，也容易产生气泡等现象。水与有机溶剂混合时，混合液变化大，往往会与室温相差很大，务必注意。
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8楼2012-03-19 22:57:09
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sunmaocheng

铁虫 (小有名气)
是不是在跑液相开始的时候，用磷酸钾缓冲液和纯乙腈先梯度洗脱？
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Sunshine
2楼2012-03-17 12:22:46
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huanghaiyu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励积极应助！ 2012-03-17 16:58:12
sunmaocheng: 金币+3, ★有帮助 2012-03-29 08:47:43
只要盐完全溶解，一般不会有问题的，如果你确实很担心，就把乙腈和盐按照你的比例混合好，然后装在一个瓶子了，再进样品，这样就没问题了，使用完清洗的时候首先要用95%的水冲洗，避免残留。
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3楼2012-03-17 16:53:32
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痴客

木虫 (正式写手)

吃货250

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sunmaocheng: 金币+3, ★有帮助 2012-03-29 08:47:53
以前用PB缓冲液和乙腈跑过，貌似没出过什么问题，但是后来老师说盐可能会堵柱子
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因为这个世界上这么多的狼，我这只牧羊犬只好放弃我的温顺，向着这个世界放出最耀眼的光。
4楼2012-03-17 18:20:37
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