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thestormcong

银虫 (小有名气)

[求助] 氨苄平板

请教关于氨苄平板的一系列知识,例如抗性维持时间,会不会长杂菌,大肠杆菌是否很多都对它具有抗性。
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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thestormcong(金币+6): ★★★很有帮助 2012-03-13 22:06:33
西瓜(金币+2): Good! 2012-03-13 23:50:47
氨苄平板一般4度放置2周(但需要注意密封保湿)不会有问题。
一般的E.coli都没有氨苄抗性
但与其他抗生素相比,氨苄有两个特点:1.氨苄只能抑制无抗性的细菌生长,而不能杀死细菌;2. 氨苄抗性基因编码的是一个分泌蛋白(b-内酰胺酶),因而,抗性克隆会将其产生的内酰胺酶分泌到周围的培养基中,因而导致其周围的抗生素被降解,从而在抗性克隆周围出现卫星菌落(这些菌落并没有抗性)。

因而在使用氨苄抗性平板时需要注意培养时间不要过长(12个小时左右即可),否则容易出现大量的卫星菌落。
2楼2012-03-13 21:23:24
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thestormcong

银虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by panda73 at 2012-03-13 21:23:24:
氨苄平板一般4度放置2周(但需要注意密封保湿)不会有问题。
一般的E.coli都没有氨苄抗性
但与其他抗生素相比,氨苄有两个特点:1.氨苄只能抑制无抗性的细菌生长,而不能杀死细菌;2. 氨苄抗性基因编码的是一个 ...

谢谢。我在做转化,抗性平板上长了很多菌,阴性对照也有长,但相对转化平板很少,于是挑取转化子鉴定质粒,提取不到,得知质粒拷贝数低,于是设计该质粒的引物来鉴定,可是pcr结果还是没有。现在怀疑挑的转化子是不是有抗性的杂菌,而且它没有质粒,因为提取不到质粒。我挑的时候也是看形态正常的,请教你了。
3楼2012-03-13 22:15:56
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

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thestormcong(金币+4): ★★★很有帮助 2012-03-14 10:21:55
氨苄平板放到37℃后,抗性大约能维持十几个小时。所以转化后在37度放的时间一般就半天多,没有就是没有,放久了长出来的都是杂菌啦。

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4楼2012-03-13 23:52:23
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thestormcong

银虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-13 23:52:23:
氨苄平板放到37℃后,抗性大约能维持十几个小时。所以转化后在37度放的时间一般就半天多,没有就是没有,放久了长出来的都是杂菌啦。

就只能维持这么短的时间啊,谢谢你的意见,请教有相关经验的大家,多多留言,谢谢啊。
5楼2012-03-14 10:16:59
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thestormcong

银虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-13 23:52:23:
氨苄平板放到37℃后,抗性大约能维持十几个小时。所以转化后在37度放的时间一般就半天多,没有就是没有,放久了长出来的都是杂菌啦。

可是我每次挑平板里的菌到含有氨苄青霉素的药瓶里,都能生长出来,表明至少我挑的菌都有氨苄抗性,这又是为什么呢?
6楼2012-03-14 10:21:49
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

引用回帖:
6楼: Originally posted by thestormcong at 2012-03-14 10:21:49:
可是我每次挑平板里的菌到含有氨苄青霉素的药瓶里,都能生长出来,表明至少我挑的菌都有氨苄抗性,这又是为什么呢?

这个就不知道了……
7楼2012-03-14 18:30:13
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zk0604

木虫 (正式写手)

我37度放个24小时没问题,4度放一个多月还是没问题,做过对照没长菌。
8楼2012-03-15 12:19:14
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dasheng1980

铁杆木虫 (知名作家)

大圣

这个贴子发的好!
dasheng1980
9楼2012-03-15 12:58:41
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eileen8519

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by thestormcong at 2012-03-14 10:21:49:
可是我每次挑平板里的菌到含有氨苄青霉素的药瓶里,都能生长出来,表明至少我挑的菌都有氨苄抗性,这又是为什么呢?

我也遇到过相同的问题,很是让人费解啊!
10楼2012-03-15 16:16:58
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