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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 救命啊！荧光定量PCR 扩增问题
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jianandy

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
2010203011: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-04-22 09:47:56
我觉得应该是环境样品DNA的问题，里面可能有一些影响PCR扩增的东西，是不是应该纯化一下？
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2010203011
11楼2012-03-18 14:51:58
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2010203011

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by jianandy at 2012-03-18 14:51:58:
我觉得应该是环境样品DNA的问题，里面可能有一些影响PCR扩增的东西，是不是应该纯化一下？

谢谢，原因可能是DNA模板太复杂，纯化会有损伤，稀释样品就稍微好一点。
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12楼2012-03-24 22:06:00
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
2010203011: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-04-22 09:48:06
我们用的也是凯杰的PCR和耗材。

凯杰的产品质量是毋庸置疑的，就是一个字：贵！

我觉得可以排除设备和耗材的问题。

原因呢，我也觉得是样品来源的问题。复杂的样品尤其是环境样品，谁都不知道是什么东西影响了PCR，最好的办法就是楼上提出的——稀释！

不用太担心做不出结果来。我曾经在很脏的未处理过的护城河水中（细菌总数很高）加标目标菌数十个/mL，然后提取RNA成功PCR。
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环境卫生、微生物学、卫生应急
13楼2012-04-16 10:19:25
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ningzhuozhuo

金虫 (小有名气)
遇到相似的问题，不知道楼主最终怎么解决的
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14楼2012-04-24 10:20:46
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天鸟

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 2010203011 at 2012-03-15 15:35:26:

这个实验做的结果怎么样呀，稀释后跑出来是什么样子的呀？求回复，谢谢
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快乐生活，我快乐
15楼2012-05-08 20:49:25
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henka

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

扩增曲线不理想有很多原因，首先就应该检查下你的引物问题，实在不行就换种试剂，良好的实验试剂才能为科研创造条件。
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16楼2013-05-01 22:07:22
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