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芥末猫

银虫 (小有名气)

[求助] 实时定量

本人做的实时定量结果相当不稳定，溶解曲线不是单一峰，而且三个重复的重复性有时候不太好，怎么办啊，因为之前着急，一下做了几个板子，现在发现没几个能用的，愁死了，有没有高手指点啊，万分感谢！！！对了，因为做之前rna反转的时候忘记定量了，不知道影响大不大呢？？急  拜谢！！！
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1楼 2012-03-12 08:40:59
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longrna

新虫 (正式写手)
★ ★
小丹木木(金币+2): 鼓励，恨热心哦 2012-03-12 10:12:37
溶解曲线不是单一峰，是不是你的引物设计得不是很特异的一条带?荧光定量之前最好PCR一下电泳检测产物是不是单一一条带。
三个重复性不好只能是加样不均一。
RNA忘记定量？不知你做荧光定量是什么目的？
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伟大航线....
2楼2012-03-12 09:06:15
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芥末猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by longrna at 2012-03-12 09:06:15:
溶解曲线不是单一峰，是不是你的引物设计得不是很特异的一条带?荧光定量之前最好PCR一下电泳检测产物是不是单一一条带。
三个重复性不好只能是加样不均一。
RNA忘记定量？不知你做荧光定量是什么目的？

引物应该是可以用的，之前半定量检测过的。
做的时候挺仔细了，难道是因为没混匀吗？
惭愧啊，当时没多想，觉得模板加一样的体积就可以了，现在想想影响貌似挺大的哦？但是我现在做的是pbs注射的对照组实验，还必须重新做吗？
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3楼2012-03-12 10:31:36
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