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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何在蛋白纯化后去除6组氨酸(6His)标签
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吉林农大

木虫 (小有名气)
лл
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我靠
11楼2012-02-29 07:50:44
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w.king124

金虫 (正式写手)
顶校友~
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12楼2012-02-29 08:49:41
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
6组氨酸标签与目的蛋白的基因之间构建酶切位点，比如凝血酶的酶切位点，在用Ni-NTA树脂螯合目的蛋白质后不用咪唑洗，而直接用凝血酶（thrombin）加缓冲溶液切割6组氨酸标签与目的蛋白的酶切位点，这样洗脱下来的就是没有6组氨酸标签的目的蛋白质。凝血酶（thrombin）的酶切位点：基因工程表达系统中融合蛋白常用的连接序列，凝血酶处理可将融合蛋白中目的蛋白与非目的蛋白的肽段分离，最适切割位点是：P4-P3-P2-Arg↓-P1′-P2′，式中P4和P3为疏水氨基酸，P1′和P2′为非酸性氨基酸，↓为切割位点。
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13楼2013-06-27 23:50:32
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匿名

用户注销 (初入文坛)
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14楼2013-10-29 09:30:59
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玲林123

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我了解到的也是加TEV酶切位点，最后就可以切除了。
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15楼2013-10-29 13:41:05
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davidck

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
13楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-27 23:50:32
6组氨酸标签与目的蛋白的基因之间构建酶切位点，比如凝血酶的酶切位点，在用Ni-NTA树脂螯合目的蛋白质后不用咪唑洗，而直接用凝血酶（thrombin）加缓冲溶液切割6组氨酸标签与目的蛋白的酶切位点，这样洗脱下来的就是 ...

请问下有具体的protocol么？比如凝血酶加缓冲溶液进行切割的时候，具体怎样进行呢？流动着切还是怎样？谢谢
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16楼2016-03-07 15:33:29
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吉林农大

木虫 (小有名气)
我也想知道
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我靠
17楼2016-03-08 14:08:35
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扫雪煎茶

禁虫
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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18楼2020-06-03 10:17:48
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