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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 慢病毒怎么纯化和浓缩呀？
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QQ2921689816

新虫 (初入文坛)
病毒纯化可以选择病毒纯化柱来浓缩滴度，慢病毒包装的具体资料可以和汉恒生物公司的技术人员联系，要一份PDF的慢病毒包装资料，很详细噢，他们的技术人员态度很好O(∩_∩)O~
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11楼2015-09-10 11:22:08
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植语

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by niuhuanhuan at 2012-12-29 18:04:34
敢问楼主的包的病毒滴度高吗？我做了半年的慢病毒包装，完全在黑暗中摸索，滴度很低，可以和一般的脂质体“媲美”了，到最后只能转293，而目标细胞完全没反应，悲催啊

浓缩搞定了吗？最近也要做浓缩，希望不吝赐教！
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12楼2015-10-14 17:39:40
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316186746

铁虫 (初入文坛)
现在alstembio公司出了一个慢病毒沉淀液很好用，不要超速离心，慢病毒滴度还能提高4倍 我们实验室一直在用，价格还便宜，国内好像上海起发还有现货
产品链接：http://www.alstembio.com/virus-production/Lentivirus-Precipitation-Solution
慢病毒的浓缩与纯化方法
1.将含有慢病毒颗粒的培养基从平板转移到无菌容器中，并以300×g离心培养基10分钟以除去细胞碎片。

2.通过0.45μm过滤器过滤上清液。

3.将过滤的上清液转移到无菌容器中，并向每4体积的含有慢病毒的上清液中加入1体积的冷的慢病毒沉淀液（4℃）。（实施例：5ml慢病毒沉淀溶液，含20ml病毒上清液）。

4.充分混合并冷藏3小时至过夜。与慢病毒沉淀液混合的含有慢病毒的上清液在4°C下可稳定长达4天。

5.在4℃下以1500×g离心混合物30分钟。离心后，慢病毒颗粒可在容器底部显示为米色或白色颗粒。

6.丢弃上清液。通过以1500×g离心5分钟来旋转残留溶液。通过抽吸去除所有的液体痕迹，小心不要打扰颗粒中沉淀的慢病毒颗粒。

7.使用冷的无菌PBS或DMEM在4℃下以1/10至1/100的原始体积重悬慢病毒颗粒。

8.在低温小瓶中分装并储存在-80°C直至准备使用。
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13楼2018-10-23 10:47:48
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