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skywalkerelf

银虫 (小有名气)

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[求助] 慢病毒怎么纯化和浓缩呀？

最近在做慢病毒的纯化和浓缩，看了一些方法，离心、过柱子、过柱子+透析，不知道那种方法最有效率？有没有好用的相关试剂盒？

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1楼 2012-02-20 09:45:48

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316186746

铁虫 (初入文坛)

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现在alstembio公司出了一个慢病毒沉淀液很好用，不要超速离心，慢病毒滴度还能提高4倍我们实验室一直在用，价格还便宜，国内好像上海起发还有现货
产品链接：http://www.alstembio.com/virus-production/Lentivirus-Precipitation-Solution
慢病毒的浓缩与纯化方法
1.将含有慢病毒颗粒的培养基从平板转移到无菌容器中，并以300×g离心培养基10分钟以除去细胞碎片。

2.通过0.45μm过滤器过滤上清液。

3.将过滤的上清液转移到无菌容器中，并向每4体积的含有慢病毒的上清液中加入1体积的冷的慢病毒沉淀液（4℃）。（实施例：5ml慢病毒沉淀溶液，含20ml病毒上清液）。

4.充分混合并冷藏3小时至过夜。与慢病毒沉淀液混合的含有慢病毒的上清液在4°C下可稳定长达4天。

5.在4℃下以1500×g离心混合物30分钟。离心后，慢病毒颗粒可在容器底部显示为米色或白色颗粒。

6.丢弃上清液。通过以1500×g离心5分钟来旋转残留溶液。通过抽吸去除所有的液体痕迹，小心不要打扰颗粒中沉淀的慢病毒颗粒。

7.使用冷的无菌PBS或DMEM在4℃下以1/10至1/100的原始体积重悬慢病毒颗粒。

8.在低温小瓶中分装并储存在-80°C直至准备使用。