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skywalkerelf

银虫 (小有名气)

[求助] 慢病毒怎么纯化和浓缩呀?

最近在做慢病毒的纯化和浓缩,看了一些方法,离心、过柱子、过柱子+透析,不知道那种方法最有效率?有没有好用的相关试剂盒?
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316186746

铁虫 (初入文坛)


现在alstembio公司出了一个慢病毒沉淀液很好用,不要超速离心,慢病毒滴度还能提高4倍 我们实验室一直在用,价格还便宜,国内好像上海起发还有现货
产品链接:http://www.alstembio.com/virus-production/Lentivirus-Precipitation-Solution
慢病毒的浓缩与纯化方法
1.将含有慢病毒颗粒的培养基从平板转移到无菌容器中,并以300×g离心培养基10分钟以除去细胞碎片。

2.通过0.45μm过滤器过滤上清液。

3.将过滤的上清液转移到无菌容器中,并向每4体积的含有慢病毒的上清液中加入1体积的冷的慢病毒沉淀液(4℃)。(实施例:5ml慢病毒沉淀溶液,含20ml病毒上清液)。

4.充分混合并冷藏3小时至过夜。与慢病毒沉淀液混合的含有慢病毒的上清液在4°C下可稳定长达4天。

5.在4℃下以1500×g离心混合物30分钟。离心后,慢病毒颗粒可在容器底部显示为米色或白色颗粒。

6.丢弃上清液。通过以1500×g离心5分钟来旋转残留溶液。通过抽吸去除所有的液体痕迹,小心不要打扰颗粒中沉淀的慢病毒颗粒。

7.使用冷的无菌PBS或DMEM在4℃下以1/10至1/100的原始体积重悬慢病毒颗粒。

8.在低温小瓶中分装并储存在-80°C直至准备使用。
13楼2018-10-23 10:47:48
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
病毒纯化就是用上面的方法啊,没有捷径啊,最简单的方法就是拿给公司去做吧。
2楼2012-02-20 10:27:51
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

amisking(金币+2): 想当专业! 2012-02-20 19:38:57
milipo有病毒浓缩柱,感觉还可以,但有损失

要不就只好超离了,对离心及要求较高,得2(g)万以上的,下来杂质较多
我的路靠我的脚踩出来!!!不走寻常路!!!
3楼2012-02-20 11:17:09
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cxl_yll

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
超速离心,或者用试剂盒Millpore Fast-trap Virus Purification and Concentation Kit
4楼2012-02-20 16:44:05
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