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nam2009

金虫 (小有名气)

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专业: 药剂学

[求助] 聚酰胺柱内的保留体积与柱体积的区别

小生在看实验指导时有些疑问，请给以指导。
   实验操作如下
   装柱：称取色谱用聚酰胺6克，置200ml烧杯中，加蒸馏水100ml轻轻摇匀，放置过夜，使之充分膨胀。装柱前轻轻搅动并倾去上层混浊液，下层再加蒸馏水复洗两次（注意计算水量，以计算柱内保留体积）。将洗好的聚酰胺连水一次倒入已处理好的柱内，打开下口开关，让水缓缓流出，在吸附剂下沉的同时，可用橡皮塞对称轻轻敲击色谱柱，使吸附剂装填均匀。待液面降至吸附剂顶部1厘米处时，关住下口，量取流出体积，求出柱内保留体积，并以此确定开始收集洗脱液的时间。然后依次用100ml  95%乙醇和150ml蒸馏水按4-5ml/min的流速过柱，待最后通过柱的蒸馏水在吸附剂上端约1厘米时，关住下口，上样。

   请问，柱内保留体积和收集洗脱液的时间有什么关系？、
   进行梯度洗脱时，每个梯度洗脱液一般是2到三倍柱体积。那么，柱内保留体积和柱体积有什么区别？、
      谢谢！！

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