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huangwensh

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励 2012-04-01 17:50:02
同意7楼意见,有可能是过热了,你转膜的时候放冰或者冰袋吗,转完以后冰或者冰袋融化了吗?要是融化了,就可能是过热,要随时观察热了就要放冰。保持温度。
11楼2012-04-01 16:50:54
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西瓜and华华

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人觉得你的蛋白分子量在100KD左右,是可以不用0.22um的PVDF膜的,因为0.22um的膜适用于转20KD左右或以下的蛋白适用,否则就浪费了,呵呵
12楼2012-04-10 15:50:36
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hubuwzm

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 山东老杜 at 2012-01-12 22:34:14:
电压低点

怎么不加个预染marker

用预染marker只要膜上有的话,相应的目的蛋白就转移过克了吗
13楼2012-05-15 22:01:08
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小梦花花

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不知道你丽春红过期了没有?我试过丽春红没染出来,但仍然能够转膜后做后续后能够显影出来结果的情况。
14楼2012-05-21 16:47:59
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JIN1990

金虫 (小有名气)

实验斗士

甲醇的作用是什么?
天天出数据,月月出文章
15楼2012-11-14 18:58:40
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yuxiongbao

铁虫 (小有名气)

三楼 说的怎么像是EMSA啊
得不到的永远在骚动
16楼2013-01-21 18:44:51
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科研民工_wj

铁虫 (初入文坛)

湿转时间电压不够。建议试试100V 2到2.5h。
生活在这个地球上 都不容易
17楼2013-06-12 20:09:36
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wl06243123

铜虫 (初入文坛)

个人觉得是不是转过了,我也用的0.45um的PVDF膜,恒流100mA(开始18V左右,结束时大概25V左右)100kD转一个80min就可以了,还有我的电转缓冲液不如你的浓度高,个人经验而已仅供参考。
三人行必有我师
18楼2013-10-11 14:15:22
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昙花巫婆

银虫 (小有名气)

1,你的甘氨酸量有点少,我们做实验的时候1倍的电泳液就加14.4g的甘氨酸。
2,滤纸应该与膜的大小一致,否则滤纸连接在一起是电流就从滤纸穿过,就减少了从膜上穿过的电流,影响转膜效果
3我们在转膜的时候都是恒定电流,120mA, 转3个小时,效果很好,你可以试试。
  希望对你的实验有帮助!
我是女博士,但我并不可怕!
19楼2013-11-04 21:34:59
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haodanfeng

新虫 (初入文坛)

100KD的蛋白我做过,转印Buffer里不用加SDS,另外我用的是100V,60min。你可以试试看。
20楼2013-11-18 17:13:35
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