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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，Western-Blot转膜不成功
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huangwensh

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励 2012-04-01 17:50:02
同意7楼意见，有可能是过热了，你转膜的时候放冰或者冰袋吗，转完以后冰或者冰袋融化了吗？要是融化了，就可能是过热，要随时观察热了就要放冰。保持温度。
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11楼2012-04-01 16:50:54
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西瓜and华华

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人觉得你的蛋白分子量在100KD左右，是可以不用0.22um的PVDF膜的，因为0.22um的膜适用于转20KD左右或以下的蛋白适用，否则就浪费了，呵呵
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12楼2012-04-10 15:50:36
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hubuwzm

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 山东老杜 at 2012-01-12 22:34:14:
电压低点

怎么不加个预染marker

用预染marker只要膜上有的话，相应的目的蛋白就转移过克了吗
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13楼2012-05-15 22:01:08
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小梦花花

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不知道你丽春红过期了没有？我试过丽春红没染出来，但仍然能够转膜后做后续后能够显影出来结果的情况。
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14楼2012-05-21 16:47:59
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JIN1990

金虫 (小有名气)

实验斗士
甲醇的作用是什么？
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天天出数据，月月出文章
15楼2012-11-14 18:58:40
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yuxiongbao

铁虫 (小有名气)
三楼 说的怎么像是EMSA啊
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得不到的永远在骚动
16楼2013-01-21 18:44:51
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科研民工_wj

铁虫 (初入文坛)
湿转时间电压不够。建议试试100V 2到2.5h。
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生活在这个地球上 都不容易
17楼2013-06-12 20:09:36
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wl06243123

铜虫 (初入文坛)
个人觉得是不是转过了，我也用的0.45um的PVDF膜，恒流100mA（开始18V左右，结束时大概25V左右）100kD转一个80min就可以了，还有我的电转缓冲液不如你的浓度高，个人经验而已仅供参考。
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三人行必有我师
18楼2013-10-11 14:15:22
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昙花巫婆

银虫 (小有名气)
1,你的甘氨酸量有点少，我们做实验的时候1倍的电泳液就加14.4g的甘氨酸。
2，滤纸应该与膜的大小一致，否则滤纸连接在一起是电流就从滤纸穿过，就减少了从膜上穿过的电流，影响转膜效果
3我们在转膜的时候都是恒定电流，120mA, 转3个小时，效果很好，你可以试试。
  希望对你的实验有帮助！
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我是女博士，但我并不可怕！
19楼2013-11-04 21:34:59
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haodanfeng

新虫 (初入文坛)
100KD的蛋白我做过，转印Buffer里不用加SDS，另外我用的是100V，60min。你可以试试看。
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20楼2013-11-18 17:13:35
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