应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，Western-Blot转膜不成功
52/1返回列表
查看: 12202  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

shenxing325

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助，Western-Blot转膜不成功

各位虫友，做了两次Western-Blot转膜都不成功，想各位帮我指点一下可能的原因，这些是我做实验的时候的条件细节：
        目的蛋白大小100kD左右，用的是湿转法，电转缓冲液（5×）的配方是：
        Glycine   15.1g
        Tris         72g
        SDS        5g
        定容至一升，使用前取200mL，再加700mL水和100mL甲醇，4度备用
        滤纸（3mm滤纸用两边各用两层）比膜和胶大比较多，之前看过一些人说滤纸要比膜小，但是好像大多数人都说对于湿转来说没有关系。
        膜用的是0.45um的PVDF膜，这个有人说要用0.22um的，是这样吗？
        电转于4度冰柜中进行，80V电压，时间2h，用立春红染色，但是什么都没有，我没有用预染Marker。
       看大多数人都说湿转是非常容易成功的，我的实验操作哪里有问题吗？请指教，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-01-12 17:51:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

JIN1990

金虫 (小有名气)

实验斗士
甲醇的作用是什么？
赞一下 回复此楼
天天出数据，月月出文章
15楼2012-11-14 18:58:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
也有可能是转过头……
赞一下 回复此楼
2楼2012-01-12 21:14:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

山东老杜

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
电压低点

怎么不加个预染marker
赞一下 回复此楼
3楼2012-01-12 22:34:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我用的是NC膜，一般喜欢用300mA横流转1个小时或者90分钟（大分子），从来没有出过问题。
没用过PVDF膜，所以不知道你的电压条件什么的是不是合适，不过PVDF膜需要先用甲醇活化正电基团，不知道你活化了没有。
赞一下 回复此楼
4楼2012-01-13 07:25:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:39 by 9i7PCSZyMzot
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:27 by 9i7PCSZyMzot
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:27 by 9i7PCSZyMzot
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:15 by 9i7PCSZyMzot
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:15 by 9i7PCSZyMzot
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:03 by 9i7PCSZyMzot
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 00:51 by 9i7PCSZyMzot
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 3/150 2026-09-20 00:15 by 9i7PCSZyMzot
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 3/150 2026-09-20 00:03 by 9i7PCSZyMzot
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:51 by 9i7PCSZyMzot
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:39 by 9i7PCSZyMzot
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:27 by 9i7PCSZyMzot
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:27 by 9i7PCSZyMzot
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:03 by 9i7PCSZyMzot
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:03 by 9i7PCSZyMzot
[教师之家] 现代”学阀”该如何界定 +3 iaeyuan 2026-09-19 3/150 2026-09-19 20:52 by 没昵称呀
[基金申请] 国社科系统bug了，是不是要放榜了？ +7 kynobel 2026-09-16 9/450 2026-09-19 14:52 by 接好运婷
[有机交流] 各位大神，目前国内有哪些比较好用的逆合成软件？ 20+3 zapen 2026-09-15 9/450 2026-09-18 18:17 by zapen
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组｜2027级博士研究生招生公告 +7 水士口 2026-09-16 8/400 2026-09-16 13:47 by kkklens
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +8 两三岁ss 2026-09-14 8/400 2026-09-16 09:46 by 水士口
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭