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qiaolinkun

银虫 (小有名气)

[求助] 微生物考研真题求助

化学物质A对细菌具有毒性，在含50mg/L物质A的固体培养基上，绝大部分细菌均不能生长。现从土样中分离到一株可以在含物质A的固体培养基上生长的假单胞菌，并已初步证实该假单胞菌能产生一种水解酶，将物质A见降解为L-丝氨酸和其他无害成分，但该酶的表达量极低，不利于进一步研究和应用。请设计大量制备该酶样品的实验方案。
跪求各位大牛讲解思路
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1楼 2012-01-04 11:26:45
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springTT

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2012-01-04 12:11:41
qiaolinkun(金币+10): ★★★★★最佳答案 谢谢 很有帮助 2012-01-04 13:35:32
1、若该水解酶基因是已知的，那么就可以提取基因组，设计引物，将该水解酶基因克隆出来，连接到表达载体上，然后进行异源表达。
2、若该水解酶基因是未知的，那么先从假单胞菌中分离纯化出该水解酶，通过SDS-PAGE确定酶的大小，并进行N端测序。知道N端部分序列后，设计简并引物，克隆该酶基因，之后再进行异源表达。
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2楼2012-01-04 11:55:42
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springTT

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by springTT at 2012-01-04 11:55:42:
1、若该水解酶基因是已知的，那么就可以提取基因组，设计引物，将该水解酶基因克隆出来，连接到表达载体上，然后进行异源表达。
2、若该水解酶基因是未知的，那么先从假单胞菌中分离纯化出该水解酶，通过SDS-PAG ...

不客气O(∩_∩)O~
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3楼2012-01-05 13:08:57
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