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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 虫子们有谁做过TA克隆呀？额想知道TA克隆的具体的实验步骤
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 虫子们有谁做过TA克隆呀？额想知道TA克隆的具体的实验步骤

虫子们有谁做过TA克隆呀？额想知道TA克隆的具体的实验步骤

告诉在哪本书上有也行啊，别从百度上一百度粘贴过来啊，最好是自己用过的实验步骤，咱不差钱啊
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好孩子！
1楼 2011-12-30 16:35:38
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qiyaocheng

木虫 (小有名气)

老虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+3): Good! 2011-12-31 13:37:55
zhang8826857(金币+5): ★★★很有帮助 多谢多谢啊，你应该做过TA克隆吧？ 2011-12-31 22:45:46
有几点体会希望能帮到你
1.获得DNA片段时注意其保真性，通过片段大小选择合适的扩增酶类型。通过PCR获得片段的时候要注意保真性酶的选择，有的酶如PFU需要自己加A尾巴的，不然就连不上18T载体。
2.通过公式计算一下连接体系，调整片段与载体的合适浓度比例。
3.根据连接酶的具体性质来连接，有的连接酶是16度，有的是22度活性最高。不要连太久时间，不然会出现解释不了的事情。哈哈
4.连好之后一定要测序哦，我就曾经被高度同源的序列坑了，悲催的两个月就毁了。
加油
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毕业回望科研路，满目疮痍一身土
12楼2011-12-31 10:24:32
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查看全部 26 个回答

shiliu2011

木虫 (正式写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+4): ★有帮助 从这里补偿你啊，呵呵 2011-12-30 21:15:04
小丹木木(金币+2, 应助指数-1): 鼓励应助 2012-01-02 12:10:42
买个pGEM-T载体，有说明书的，照着做就可以了，就是酶切--连接--转化--挑阳性克隆之类的。 不难做
http://www.shinegene.org.cn/tools/pGEMT.pdf
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鎴戜滑鎬绘槸澶繃浜庡湪涔庝竴鏃剁殑寰楀け锛屽?村繕璁颁簡鎴?闀挎�?鏄渶閲?瑕?鐨�
2楼2011-12-30 20:20:35
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shiliu2011 at 2011-12-30 20:20:35:
买个pGEM-T载体，有说明书的，照着做就可以了，就是酶切--连接--转化--挑阳性克隆之类的。 不难做
http://www.shinegene.org.cn/tools/pGEMT.pdf

我想用pMD18-T simple，有没有相应的说明书？？？
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好孩子！
3楼2011-12-30 21:16:45
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhang8826857 at 2011-12-30 21:16:45:
我想用pMD18-T simple，有没有相应的说明书？？？

直接google，第一个就是……
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4楼2011-12-30 22:41:06
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