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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何抽提较大的质粒
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yhwcyj2008

木虫 (小有名气)

[交流] 如何抽提较大的质粒

各位高人：我最近在作一个大片段的克隆，但是在作质粒（40K）的抽提时遇到了麻烦，总是抽不出质粒，偶尔抽出来也是很淡，我们用的是omega的普通抽提试剂盒。我也曾试过传统的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ液抽提，但总是有蛋白和RNA的污染，不知该如何是好？不知各位在抽提较大的质粒时有什么好的方法，或者有什么好的试剂盒，请各位指点！

[ Last edited by telomerase on 2007-11-28 at 17:31 ]
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1楼 2007-01-29 00:38:54
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wwwkkk83

木虫 (著名写手)
★
asr(金币+1):谢谢!...
超纯度大型质粒的抽提试剂盒

专门用于纯化小于250kb的BAC、PAC、P1或粘粒DNA，可彻底去除基因组DNA的污染。



货名                                 规格           货号                 价格(¥

QIAGEN large-Construct Kit       10perps         12462                 4338
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2楼2007-01-29 12:23:16
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yhwcyj2008

木虫 (小有名气)
非常感谢楼上的朋友
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3楼2007-02-01 00:38:43
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laihx38j

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽
4楼2007-04-21 18:36:44
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)
★
johnsooh(金币+1,VIP+0):thx
质粒大,所以拷贝会少自然提出的也少,用碱法提应该可以,多集些菌,然后蛋白那部多抽些应该会好些,最后消化时间也略长些吧,2h可以试一下
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5楼2007-04-21 20:33:08
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随风而逝

金虫 (小有名气)
★
johnsooh(金币+1,VIP+0):thx
减法抽提的量确实比较大，我们实验室都是用这种方法抽30000左右的大质粒的。你的量比较少可能有以下几个问题：
1. 大质粒不能保菌，每次都要转化质粒，调斑。剩余的部分菌液，赶在第二天前大扩。千分之一加菌液，青霉素千分之一稍小些。
2. 摇菌时间保证十二小时，时间稍长，大质粒会迅速消失。
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6楼2007-11-28 12:43:28
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