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yhwcyj2008

木虫 (小有名气)

[交流] 如何抽提较大的质粒

各位高人:我最近在作一个大片段的克隆,但是在作质粒(40K)的抽提时遇到了麻烦,总是抽不出质粒,偶尔抽出来也是很淡,我们用的是omega的普通抽提试剂盒。我也曾试过传统的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ液抽提,但总是有蛋白和RNA的污染,不知该如何是好?不知各位在抽提较大的质粒时有什么好的方法,或者有什么好的试剂盒,请各位指点!

[ Last edited by telomerase on 2007-11-28 at 17:31 ]
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wwwkkk83

铁杆木虫 (著名写手)


asr(金币+1):谢谢!...
超纯度大型质粒的抽提试剂盒

专门用于纯化小于250kb的BAC、PAC、P1或粘粒DNA,可彻底去除基因组DNA的污染。



货名                                 规格           货号                 价格(¥

QIAGEN large-Construct Kit       10perps         12462                 4338
2楼2007-01-29 12:23:16
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yhwcyj2008

木虫 (小有名气)

非常感谢楼上的朋友
3楼2007-02-01 00:38:43
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laihx38j

禁虫 (职业作家)

本帖内容被屏蔽

4楼2007-04-21 18:36:44
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)


johnsooh(金币+1,VIP+0):thx
质粒大,所以拷贝会少自然提出的也少,用碱法提应该可以,多集些菌,然后蛋白那部多抽些应该会好些,最后消化时间也略长些吧,2h可以试一下
5楼2007-04-21 20:33:08
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随风而逝

金虫 (小有名气)


johnsooh(金币+1,VIP+0):thx
减法抽提的量确实比较大,我们实验室都是用这种方法抽30000左右的大质粒的。你的量比较少可能有以下几个问题:
1. 大质粒不能保菌,每次都要转化质粒,调斑。剩余的部分菌液,赶在第二天前大扩。千分之一加菌液,青霉素千分之一稍小些。
2. 摇菌时间保证十二小时,时间稍长,大质粒会迅速消失。
6楼2007-11-28 12:43:28
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