什么是限制性内切核酸酶的星号活性? - 分子生物 - 综合其他

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铜虫 (小有名气)

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9楼: Originally posted by 小东的东东 at 2011-12-29 10:18:58:
不需要纯化再酶切。你可以先用其中一个酶在10ul体系底下反应，然后加第二个酶的时候把反应体系加大到20ul进行酶切，这样就相当于把第一步反应的缓冲液稀释了

对不起，我想问一下，是不是直接将第一次酶切的10微直接加入第二次酶切体系，是最终体积到达20微

11楼2011-12-29 19:53:41

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木虫 (正式写手)

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楼: Originally posted by 小东的东东 at 2011-12-29 10:18:58:
不需要纯化再酶切。你可以先用其中一个酶在10ul体系底下反应，然后加第二个酶的时候把反应体系加大到20ul进行酶切，这样就相当于把第一步反应的缓冲液稀释了

我也有同样的问题，第二次酶切的时候，是不是总体系为20微升，buffer2微升，DNA就是第一次酶切的10微升，酶加1-2微升，最后用水补足20微升，您的意思就是这样的吗？不知我理解的对不？

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12楼2011-12-30 11:51:23

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银虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): 鼓励 2011-12-31 22:07:50

一般你的总酶量不超过体系的1/10，星号活性也不会发生，所以你可以适当的减少点酶，延长时间

13楼2011-12-31 10:43:35

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