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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 微米和纳米 » 综合其他 » 荧光显微镜测量子点荧光强度的遇到的问题
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maxingyi

木虫 (正式写手)

小马求学

[求助] 荧光显微镜测量子点荧光强度的遇到的问题 已有1人参与

大家好。

用荧光显微镜测微量的量子点的荧光强度，因为量子点的浓度太低，显微镜根本看不清，都是一片黑，所以取不了图（无论怎样调焦，都是一片黑，因此不知道什么时候取的图是最佳图像），因此也就没法得到准确的荧光强度，请问各位虫友这种情况如何解决？

欢迎虫友们交流，提供帮助者不胜感激，必有答谢。

[ Last edited by maxingyi on 2011-12-21 at 21:46 ]
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千里马常有
1楼 2011-12-21 20:44:55
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回帖置顶 ( 共有1个 )

sally208

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xjajx(金币+1, MN-EPI+1): 2011-12-23 22:06:54
maxingyi(金币+3): ★★★很有帮助 2011-12-30 13:57:58
Personal suggestions:
(1) Measure the quantum yield of your QDs, to make sure that these QDs you prepared are bright enough to be imaged under the microscopy.
(2) Try to locate the suitable position of your focus with bright mode (or DIC mode)
(3) In order to see single QDs, you should use low particle concentration, such as 10 nM. If you can not observe the particles clearly, try to adjust the exposure time or laser intensity.

Good luck!
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8楼2011-12-23 20:38:25
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普通回帖

liudb

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xjajx(金币+1): 2011-12-23 22:05:13
不知你用的是那种显微镜，leica还是confocu，可以提高倍数或用油镜试试。
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maxingyi
谦虚、谨慎、得体
2楼2011-12-21 20:48:28
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maxingyi

木虫 (正式写手)

小马求学
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by liudb at 2011-12-21 21:48:28:
不知你用的是那种显微镜，leica还是confocu，可以提高倍数或用油镜试试。

您好，是Nikon Eclipse 80i 的荧光显微镜，目镜是10×，物镜是100×的。量子点因为只有几纳米，即便用油镜也只能看到一片绿色。浓度很小的时候连绿色也没有，一片黑。请问对此有什么进一步额建议吗？

此外，荧光显微镜最大可以放大的多少倍？有可以观察到纳米级别的吗？
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千里马常有
3楼2011-12-21 21:12:16
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liudb

木虫 (著名写手)
★
xjajx(金币+1): 2011-12-23 22:06:39
引用回帖:
3楼: Originally posted by maxingyi at 2011-12-21 21:12:16:
您好，是Nikon Eclipse 80i 的荧光显微镜，目镜是10×，物镜是100×的。量子点因为只有几纳米，即便用油镜也只能看到一片绿色。浓度很小的时候连绿色也没有，一片黑。请问对此有什么进一步额建议吗？

此外，荧 ...

荧光显微镜肯定看不到纳米级别的东西，如果要看的话只能用透射电镜。
你看看选择的激发波长是否合适，量子点的荧光一般都很强，即使浓度很低，应该是可以看到的。
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maxingyi
谦虚、谨慎、得体
4楼2011-12-22 09:16:17
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maxingyi

木虫 (正式写手)

小马求学
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by liudb at 2011-12-22 10:16:17:
荧光显微镜肯定看不到纳米级别的东西，如果要看的话只能用透射电镜。
你看看选择的激发波长是否合适，量子点的荧光一般都很强，即使浓度很低，应该是可以看到的。

好的，谢谢您的指导。量子点的Emission wavelength是529 nm，实验的时候是在515-555 nm、Darkfield下测的，请问这样设置有问题吗？
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千里马常有
5楼2011-12-23 16:05:38
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hxb0917

金虫 (著名写手)
楼主，您好！
请教您一个问题，我用的荧光显微镜也是Nikon Eclipse 80i，发现现在不能使用荧光功能了，也就是把光源调到紫外档 ，目镜里看不到荧光发射。以前我用该仪器拍过荧光照片的。请问如何才能调回来？
谢谢！！
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6楼2011-12-23 17:35:32
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maxingyi

木虫 (正式写手)

小马求学
引用回帖:
楼: Originally posted by hxb0917 at 2011-12-23 18:35:32:
楼主，您好！
请教您一个问题，我用的荧光显微镜也是Nikon Eclipse 80i，发现现在不能使用荧光功能了，也就是把光源调到紫外档 ，目镜里看不到荧光发射。以前我用该仪器拍过荧光照片的。请问如何才能调回来 ...

您好，很抱歉，我也是刚接触荧光，对这显微镜也不很熟悉。
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千里马常有
7楼2011-12-23 17:58:22
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maxingyi

木虫 (正式写手)

小马求学
欢迎同行多加交流~
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千里马常有
9楼2012-10-04 20:56:46
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

普通光学显微镜的分辨极限为200nm
SIM大约100nm

不过你这个有荧光，浓度低点儿，应该可以看得到的，和你的直径关系不大，和你的量子产率有关吧

如果看不清，尝试增加激光强度，如果还是不行，估计你要改善你的材料了。

或者你用荧光分光光度计测个平均的值再说。
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致良知
10楼2014-05-14 21:55:53
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