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血样经沉淀处理，离心后可以直接进LC-MS吗？ 已有1人参与
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本人处理血样方法是：3倍甲醇沉淀，15000转10min离心2次，然后进LC-MS。 最近发现LC-MS柱压很高，怀疑可能是柱子被堵了，是不是血浆中蛋白处理不充分呢，难道离心后还需要过滤膜么？ 求高人解惑，不胜感激～～  |
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yangsophia21
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【答案】应助回帖
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这么做肯定是可以的，也有很多实验室在用，但肯定是对色谱柱、离子源有一定的影响。 有些方面也是要注意： 1. 沉淀的溶剂和体积比。有篇文献专门研究不同的沉淀剂对血浆蛋白沉淀的效果（你可以上网查查），乙腈是要好过甲醇，而且体积比至少是3:1。4度放置、4度高速离心，也有利于提高沉淀效果。 色谱柱尽量不要用超高压的，如1.8um，压力会上的很快。我们曾经乙酸乙酯提取的样品，1.8um的柱子的压力很快升上去了。 尽量使用预柱 上过血浆直接沉淀样品的色谱柱，切记冲洗时不要用高比例的有机相（如70%以上），会加速柱压上升。（据分析是因为将截留在柱头的蛋白再次变性，相当于第二次蛋白沉淀，形成致密层。 2. 色谱峰的峰形。 当进样的样品中所含的有机相比例，高于流动相中的有机相比例时，色谱峰就会变宽、胖。这点你可以试试，很明显。（当然，你也可以通过设定梯度洗脱来改善峰形） 3. 对喷雾针、离子源挡板的影响。 连续测定直接沉淀的样品后，观察喷雾针和离子源的挡板，就可以看到上面有焦黑的一层。（当然，可以通过超声和清洗，除去。），短期对测定似乎没有明显影响。 所以，如果你的质谱有切换阀，建议将前面的（如1-2min左右的）的流出物to wast，这样喷雾针和挡板就会干净很多。 暂时想到这些。 |
19楼2013-02-27 17:25:43
2楼2011-12-21 13:09:36
kkbyb
木虫 (著名写手)
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爱予橙3楼2011-12-21 15:44:44
4楼2011-12-22 09:56:51