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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 荧光的测定
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sxdwxx

木虫 (正式写手)

[交流] 荧光的测定

有专门研究荧光的吗，我是刚开始接触荧光的，想请教你们几个问题，
1.如何确定最大激发波长和发射波长
2。最大激发波长可以通过紫外最大吸收波长确定吗？
3，激发谱图和发射谱图是如何做出来的，具体一点哦
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1楼 2011-12-10 12:29:47
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张淼

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
sxdwxx(金币+1):谢谢参与
sxdwxx(金币+1): 2011-12-10 19:10:36
padodo(金币+3): 感谢应助！ 2011-12-12 16:11:30
荧光涉及光的吸收和发射两个过程，因此任何荧光化合物，都有两种特征的光谱：激发光谱(exitation spectrum)和发射光谱(emission spectrum)。

荧光属于光致发光，需选择合适的激发光波长(Ex)以利于检测。激发波长可通过荧光化合物的激发光谱来确定。激发光谱的具体检测办法是通过扫描激发单色器，使不同波长的入射光激发荧光化合物，产生的荧光通过固定波长的发射单色器，由光检测元件检测。最终得到荧光强度对激发波长的关系曲线就是激发光谱。在激发光谱曲线的最大波长处，处于激发态的分子数目最多，即所吸收的光能量也最多，能产生最强的荧光。当考虑灵敏度时，测定应选择最大激发波长。

一般所说的荧光光谱，实际上仅指荧光发射光谱。它是在激发单色器波长固定时，发射单色器进行波长扫描所得的荧光强度随荧光波长(即发射波长，Em)变化的曲线。荧光光谱可供鉴别荧光物质，并作为荧光测定时选择合适的测定波长的依据。

另外，由于荧光测量仪器的特性，使光源的能量分布、单色器的透射率和检测器的响应等性能会随波长而变，所以同一化合物在不同的仪器上会得到不同的光谱图，且彼此间无类比性，这种光谱称为表观光谱。要使同一化合物在不同的仪器上能得到具有相同特性的荧光光谱，则需要对仪器的上述特性进行校正。经过校正的光谱称为真正的荧光光谱。

激发波长和发射波长是荧光检测的必要参数。选择合适的激发波长和发射波长，对检测的灵敏度和选择性都很重要，尤其是可以较大程度地提高检测灵敏度。
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2楼2011-12-10 12:55:11
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chaoyu

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
sxdwxx(金币+1):谢谢参与
sxdwxx(金币+1): 2011-12-10 19:10:25
padodo(金币+3): 感谢应助！ 2011-12-12 16:11:45
我的办法就是，设一个常用的激发，如300nm，扫发射峰。根据发射峰再扫激发峰，这个激发峰位置就是对的了，然后再扫发射，得到对的发射峰。
荧光跟紫外，有的能对上，有的有偏差，不好比。
至于作图，导出ASC码文件用origin做。
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4楼2011-12-10 17:01:03
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水孩子

铜虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
padodo(金币+3): 感谢应助！ 2011-12-12 16:12:00
引用回帖:
4楼: Originally posted by chaoyu at 2011-12-10 17:01:03:
我的办法就是，设一个常用的激发，如300nm，扫发射峰。根据发射峰再扫激发峰，这个激发峰位置就是对的了，然后再扫发射，得到对的发射峰。
荧光跟紫外，有的能对上，有的有偏差，不好比。
至于作图，导出ASC码文 ...

我也是初学者，最近摸了一点点

找激发的方法：固定发射波长，如200,全波长范围扫描激发波长；
             再固定发射波长，如210，或者220，全波长范围扫激发波长，
几次扫描下来，位置固定不变的峰就是激发波长了。
为什么用紫外，因为紫外强度大，扫出来的峰强度会比其他频率扫出来的要明显些。

用紫外吸收确定激发波长的方法，有不准确的时候，不是十分赞同。。。。
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5楼2011-12-12 07:58:16
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水孩子

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
什么叫具体一点？！呵呵，这个只能边操作边遇到问题再来问，具体问题具体对待了。。。

我做了2个月多，问题不是一般的多，加油吧！
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6楼2011-12-12 08:00:42
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nisang

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我最近也做了点荧光，小问题是层出不穷。周边没人懂，啥都得自己摸索。烦死。
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7楼2011-12-12 10:47:50
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mikeliubao

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
一些仪器上有prescan，就可以知道大概最大激发与最大发射，然后，根据它推荐的最大激发，扫描发射光谱（荧光光谱），确定最大发射接着反过来，根据得到的最大发射，扫描激发光谱，的最大激发。

另外i，要注意倍频峰、二级吸收峰是比较尖锐的，强度也是比较大的。要扣除这些峰。
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8楼2011-12-12 16:38:23
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zhoupeng873楼
2011-12-10 13:29   回复  
sxdwxx(金币+1):谢谢参与
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