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蓝一二三

新虫 (初入文坛)

[求助] HPLC测定血清中药物浓度

各位高手请帮助解答一下：
我做的新药，HPLC条件已经摸好了，小鼠尾静脉注射该药，在不同时间点采血，测定血清中药物浓度，紫外检测，244nm，甲醇：乙腈;水（三乙胺）68:20:12,   0.8ml/min流速，血清加入3倍量的甲醇去蛋白后离心取上清，为什么在该药出峰的地方却没有峰呢，怎么检测不到这种药物信号呢，药物已经用到小鼠毒理的最大浓度了，该怎么测？测不出来和蛋白结合率有关么？是不是因为白白结合率高，去蛋白的时候把药物去除了呢？

疑问比较多，多谢各位
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1楼 2011-12-08 21:25:01
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cuigang1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

LZ有没有做好空白对比试验阿   就这一个的话很难说的
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hold
2楼2011-12-12 11:36:12
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蓝一二三

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by cuigang1987 at 2011-12-12 11:36:12:
LZ有没有做好空白对比试验阿   就这一个的话很难说的

当然做了空白对照了
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3楼2011-12-14 09:33:57
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cuigang1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 蓝一二三 at 2011-12-14 09:33:57:
当然做了空白对照了

那不应该什么都没有分析出来啊   要么就是对照做的不够
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hold
4楼2011-12-14 10:08:33
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mc0326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的化合物在血浆里面稳不稳定，有没有酯键，血浆里面有酯酶，如果不稳定的话在取血的时候就要加酯酶抑制剂，要不取出来放一会就讲解掉了
另外，一般化合物血浆蛋白结合率再高的话，比如达到99%，也不会和蛋白一起沉淀，除非它会和蛋白共价结合，这个要看结构了
还有一种可能，有些化合物在血浆基质中的保留时间和纯的标准品保留时间可能不一样，不过楼主说方法已经摸好了，应该排除这种情况吧
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5楼2012-03-10 23:21:43
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