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红木烈士

铜虫 (小有名气)

[交流] [求助]有谁懂植物石蜡切片的啊~~~请进来~~

我现在在做一直植物的芽石蜡切片,但是老是做不好,石蜡切片时,植物组织成粉末,无法切成形,请求解决方法,请各位懂植物的前辈帮忙!!
急!!!!!!:
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xyf1688

捐助贵宾 (小有名气)


asr(金币+1):谢谢! :)
是不是你包埋的温度太高,一般60度左右,而且要时间长,如果材料过大,可以过夜。
2楼2007-01-08 09:59:41
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phyllislhy

木虫 (正式写手)


asr(金币+1):谢谢! :)
是不是脱水脱的太过了?另外,是不是在石蜡中包埋的时间短?建议你用sigma的石蜡,我们实验室有人做过,用一般的石蜡效果根本不好
3楼2007-01-08 10:02:27
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红木烈士

铜虫 (小有名气)

谢谢上面两位前辈指教!
我使用的脱水时间是每个梯度3min,最后纯酒精我放置20s,本身材料比较嫩,所以我想脱水时间也相应短些;我石蜡包埋,置换出二甲苯时间是这样控制的:首先采用50%石蜡与50%二甲苯混合液55度过夜,然后在打开瓶盖,让二甲苯挥,升高石蜡浓度,这样放置2小时,再换入纯石蜡2h,最后再换一次纯石蜡2h。
各位前辈你们看我过程有什么地方不正确的?
4楼2007-01-08 21:40:02
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xiaojing459

银虫 (小有名气)


asr(金币+1):谢谢! :)
我觉得是你脱水不彻底,我做过种子胚的石蜡切片,也比较嫩,切的效果还行。我使用的脱水时间为1h,无水已醇45min ,你试试吧
5楼2007-01-08 22:19:35
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h8872410kong

金虫 (小有名气)


asr(金币+1):谢谢! :)
脱水时间是每个梯度20min左右,最后纯酒精我放置30min两次,
6楼2007-01-08 22:35:30
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知秋

至尊木虫 (著名写手)


asr(金币+1):谢谢! :)
材料的破碎,主要原因是由于浸蜡或包埋过程中温度过高或者透明时间过长,使材料发脆所导致的。可在材料上吐些唾液,待几分钟后擦干净再切。若不凑效,则只能重新制作。
7楼2007-01-10 10:29:14
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无根萍

银虫 (小有名气)


asr(金币+1):谢谢! :)
根据经验,直觉告诉我,你的材料里面有气泡,所以怎么切都是粉末状,烂的。因此,建议在固定材料的时候就抽气,使材料沉入固定液。如果是没法改变这一步了,那么请在浸蜡前抽气,但注意了这个时候抽气要慢慢的抽,否则会破坏其中的细微结构。 总之,抽气的作用是使液体占住整个植物组织里的空间,这样在切片的时候就不至于切不出好片子了。另外,你还得注意脱水梯度和浸蜡梯度要多设几个梯度,尤其是越到后面的时候,比如说到纯酒精的时候我是3次的,在浸蜡时不盖盖子,慢慢加蜡,直到不能溶解时, 最后倾出石蜡(也许含少量的二甲苯),换新蜡(每天2次,连续2天),这样出来的材料 切片是没有烂的或说粉末状的。
学术交流的联系方式: huangqingbeijing@yahoo.com.cn
8楼2007-01-10 23:59:31
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mhywht

银虫 (小有名气)

你脱水和侵蜡时间都短,
9楼2007-01-11 09:10:54
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红木烈士

铜虫 (小有名气)

谢谢无根萍前辈的帮助,你所说的这些注意点对我很有帮助!
10楼2007-01-12 23:57:21
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