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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大片段基因克隆
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poog502

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+2): 有道理！ 2011-11-22 10:56:32
分成几段扩增，酶切，连接
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11楼2011-11-22 08:11:12
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A406

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
那么大片段，酶切位点也很难选 就算有可以选的也会加入酶切位点的碱基，这应该怎么解决呢？
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12楼2011-11-22 13:22:23
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poog502

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by A406 at 2011-11-22 13:22:23:
那么大片段，酶切位点也很难选 就算有可以选的也会加入酶切位点的碱基，这应该怎么解决呢？

的确，这么大的片段很难扩增，只能一点点扩增出来。如果酶切位点与载体不匹配，那么以后即使得到了片段仍然很难进行接下来的研究工作。需要自己改造载体等。具体请高手支招... ...
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13楼2011-11-22 14:11:02
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lihegang2000

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
还是找BAC克隆做模板吧
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14楼2011-11-22 16:20:03
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angelee

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
有没有克隆4kb左右基因的好方法，求解答
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15楼2011-12-09 21:44:24
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gandalf886

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
40kb有点长了，最常扩过17kb的，用的takara LAtaq，不过用来做克隆就有点惨了，突变太多。
可行的办法就是分段扩，比如分8端，每段5kb，然后每段加上同源臂，进酵母重组成一个大片段，具体看这篇文献
Shao, Z., and H. Zhao. 2009. DNA assembler, an in vivo genetic method for rapid construction of biochemical pathways. Nucleic Acids Research 37:e16.
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16楼2011-12-10 16:44:28
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