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poog502

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
wanhscn(金币+2): 有道理! 2011-11-22 10:56:32
分成几段扩增,酶切,连接
11楼2011-11-22 08:11:12
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A406

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
那么大片段,酶切位点也很难选 就算有可以选的也会加入酶切位点的碱基,这应该怎么解决呢?
12楼2011-11-22 13:22:23
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poog502

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by A406 at 2011-11-22 13:22:23:
那么大片段,酶切位点也很难选 就算有可以选的也会加入酶切位点的碱基,这应该怎么解决呢?

的确,这么大的片段很难扩增,只能一点点扩增出来。如果酶切位点与载体不匹配,那么以后即使得到了片段仍然很难进行接下来的研究工作。需要自己改造载体等。具体请高手支招... ...
13楼2011-11-22 14:11:02
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lihegang2000

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
还是找BAC克隆做模板吧
14楼2011-11-22 16:20:03
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angelee

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
有没有克隆4kb左右基因的好方法,求解答
15楼2011-12-09 21:44:24
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gandalf886

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
40kb有点长了,最常扩过17kb的,用的takara LAtaq,不过用来做克隆就有点惨了,突变太多。
可行的办法就是分段扩,比如分8端,每段5kb,然后每段加上同源臂,进酵母重组成一个大片段,具体看这篇文献
Shao, Z., and H. Zhao. 2009. DNA assembler, an in vivo genetic method for rapid construction of biochemical pathways. Nucleic Acids Research 37:e16.
16楼2011-12-10 16:44:28
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