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yeshui

铁虫 (小有名气)

[求助] 表达表达

我做蛋白表达，将重组子转化宿主菌的时候长的不好，只有几个。可是加抗生素摇过夜菌和对数期的菌都摇起来了，为什么用PCR验证却没有带呢（做了两次都没带）？我取1ul菌液做模板
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yeshui

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1楼 2011-11-17 20:38:30
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回天堂的天使

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你可以抽质粒酶切试试看。选取一个适当的酶切位点。
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2楼2011-11-17 20:48:35
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yeshui

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 回天堂的天使 at 2011-11-17 20:48:35:
你可以抽质粒酶切试试看。选取一个适当的酶切位点。

这个重组质粒都是双酶切验证和PCR验证过的啊
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3楼2011-11-18 09:47:33
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回天堂的天使

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by yeshui at 2011-11-18 09:47:33:
这个重组质粒都是双酶切验证和PCR验证过的啊

那你转化重组菌的鉴定也可以考虑用酶切鉴定。或者用测序验证？还有可能是你的重组菌的感受态转化率的问题。
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4楼2011-11-20 13:08:28
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yeshui

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
之前与载体PET26b连接的时候测过序列，没问题的
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5楼2011-11-20 18:32:01
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

楼主没带是指弥散还是。。？抗生素是不是没失效的,摇菌起来的是杂菌吗？
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yeshui
jiayoubashaonian
6楼2011-11-20 19:30:01
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yeshui

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-11-20 19:30:01:
楼主没带是指弥散还是。。？抗生素是不是没失效的,摇菌起来的是杂菌吗？

不是弥散，是没有带，抗生素应该没问题啊，这正是奇怪的地方啊
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7楼2011-11-21 10:05:58
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