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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选卫星菌落问题
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精精

金虫 (小有名气)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 精精 at 2011-11-15 11:21:55:
蓝白斑筛选培养19小时，菌落仍旧很小，但是出现很多卫星菌落，以前不会那么早出现卫星菌落的，严重影响我挑取单菌落，请教各位大侠，是什么原因会那么早出现卫星菌落啊？谢谢
[eimg]f5/89/1136439_1321327 ...

还有就是挑白斑后，转化子用M13引物扩增，会扩出两三百的来（目的基因1000多），这对引物也不太好啊
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少才微善
11楼2011-11-17 09:46:33
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精精

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 精精 at 2011-11-17 09:46:33:
还有就是挑白斑后，转化子用M13引物扩增，会扩出两三百的来（目的基因1000多），这对引物也不太好啊

这是扩的空的载体上的序列吧？
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少才微善
12楼2011-11-17 09:48:33
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 精精 at 2011-11-17 09:43:48:
16个小时左右就不怎么长，一到将近20个小时的时候就很多，但是有时候转化子就长的慢。

可能跟感受态也有关。我们实验室以前的感受态细胞，转化后16小时左右菌落就长得很大了，但最近这一批感受态，普遍要20个小时才能长出很小的菌落……
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13楼2011-11-17 18:36:19
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821678162

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 欢迎新虫交流哦 2011-11-17 21:41:12
进行蓝白斑筛选的菌培养时间不要超过16h，一般12-16左右合适，如果是构建质粒的话用不着蓝白斑，假阳性和假阴性比较多，我们这里就直接扎菌PCR，看结果。
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14楼2011-11-17 19:10:35
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精精

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-17 18:36:19:
可能跟感受态也有关。我们实验室以前的感受态细胞，转化后16小时左右菌落就长得很大了，但最近这一批感受态，普遍要20个小时才能长出很小的菌落……

这个是的，我上次那个感受态长得比这个更慢。。。
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少才微善
15楼2011-11-18 09:18:37
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精精

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 821678162 at 2011-11-17 19:10:35:
进行蓝白斑筛选的菌培养时间不要超过16h，一般12-16左右合适，如果是构建质粒的话用不着蓝白斑，假阳性和假阴性比较多，我们这里就直接扎菌PCR，看结果。

嗯，谢谢！
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少才微善
16楼2011-11-18 09:19:15
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

1：培养时间过长，一般情况下12-16小时左右就可以长出单克隆，随即挑取单克隆即可；
2：不过长出了微卫星菌落，你挑目的菌落的时候带上了微卫星其实也是无所谓的，微卫星菌落在带抗生素的板子上是不长的。。。
祝好运！
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精精
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
17楼2011-11-18 10:23:01
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飘在海上的雪

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

有的人 说是连接的时候出现的问题。
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不在沉默中爆发，就在沉默着死亡！
18楼2011-11-19 11:34:49
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healerly

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
19楼2011-11-19 11:40:22
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精精

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 精精 at 2011-11-17 09:48:33:
这是扩的空的载体上的序列吧？

是的，这个200多的应该是没连接上
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少才微善
20楼2011-11-19 15:52:23
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