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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 三酶切体系
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tongxinkxy

银虫 (小有名气)

[求助] 三酶切体系

我的目的序列和T载体长度一样，现在我的目的序列已经连到了T载体上面，现在需要把目的序列切下来回收，连到我需要的另一个表达载体上去

但是双酶切的话，电泳不能把目的序列和T载体分开，所以在T载体上另找了一个载体上有而目的基因没有的酶切位点

现在准备用三个酶切

请问，三个酶能放一个体系吗？

听一些人说，条件不好选，那能一个一个酶的切吗？
切完一个，胶回收，再切下一个
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1楼 2011-10-28 10:30:42
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

可以一个个酶切
比较费时间
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2楼2011-10-28 10:37:55
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
只要有共用buffer，三酶切完全没问题，我以前做过的，
另外，你3000bp的片段完全可以用高保真酶PCR出来。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2011-10-28 11:27:05
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2011-10-28 19:16:07
只要有共用buffer，三酶切完全没问题，我以前做过的，
另外，你3000bp的片段完全可以用高保真酶PCR出来。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2011-10-28 11:27:20
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小周

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流！ 2011-10-28 19:16:13
我前段时间遇到的问题和你的一模一样，我当时就是找了一个酶（它的酶切位点只存在载体上而不存在目的片段里），加上另外的两个酶，选一个比较通用的BUFFER，在一个体系里直接三酶切，然后回收目的片段，没有任何问题。
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5楼2011-10-28 12:06:51
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amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2011-10-28 19:16:19
tongxinkxy(金币+30): 5 2011-10-29 12:02:36
如果能在同一种Buffer里酶切原则上是可以进行的，但是如果是我，我会先做双酶切，然后再用载体上独有的那个酶再切，这样保准一些，也不会出太多的问题，因为毕竟三种蛋白加在一起总担心会有问题，个人建议，仅供参考。
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6楼2011-10-28 13:16:51
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6491333

铁虫 (小有名气)
我的测序结果显示我5端没有酶切位点

发自小木虫Android客户端
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怪我咯|本人是用生命唱歌的歌手一名!
7楼2017-06-26 09:29:11
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6491333

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 6491333 at 2017-06-26 09:29:11
我的测序结果显示我5端没有酶切位点

这是什么原因

发自小木虫Android客户端
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怪我咯|本人是用生命唱歌的歌手一名!
8楼2017-06-26 09:29:23
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