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烟草 RNAi
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| 请教：烟草中相关基因RNAi载体的构建以及烟草的遗传转化。 |
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【答案】应助回帖
xufeifei724(金币+20, 博学EPI+1): 谢谢！ 2011-10-17 16:27:57
| 一个RNAi单元是在相向的CaMV35S启动子之间插入gus基因片段，该片段两端带有SapI的酶切位点，基因组DNA在用Sau3AI酶切后，在粘性末端补加一个T就可以和SapI的粘性末端互补，从而把基因组DNA片段克隆到双向启动子之间，转入植物表达得到相应的dsRNA，实现RNA干扰作用；另一套的RNAi单元在是相向的CaMV35S启动子之间插入gfp基因片段，该片段两端带有Bsu36I的酶切位点，可将经RT-PCR得到的cDNA在dTTP的保护下，用T4DNApolymerase处理后通过Bsu36I克隆到相向启动子之间，转入植物表达得到相应的dsRNA；需要通过农杆菌LBA4404介导的感染将gus基因和gfP基因转入烟草，经过潮霉素抗性筛选，得到能表达gu。 |
2楼2011-10-17 15:16:33