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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 分离到一杀虫细菌，如何确定其杀虫活性物质
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kaizi0311

铁虫 (初入文坛)

[求助] 分离到一杀虫细菌，如何确定其杀虫活性物质

如题，分离到了一株细菌（但不是苏云金芽孢杆菌），如何确定它的杀虫活性物质是什么，如果确定了是蛋白又怎么确定它的编码基因，技术路线怎么设计呢，先谢过大家了！如果有什么相关的文献可以发到我邮箱：664959163@qq.com
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1楼 2011-10-17 13:19:09
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陈青chenqing

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-10-27 09:35:36
如果是突变株的话，可以用SSH的方法筛选特异表达的基因，在做验证。知道蛋白质的话，可以测序，再反推其DNA序列，设计合适的引物，把基因扩增出来嘛
赞一下(1人) 回复此楼
自己的未来自己创造！
4楼2011-10-26 22:33:54
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kaizi0311

铁虫 (初入文坛)
麻烦大家，有没有会的，难道我发错版块了
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2楼2011-10-17 18:12:04
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gaolandragon

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare(金币+2): 欢迎新虫发帖交流 2011-10-26 18:23:05
先做纯化 拿到纯品后测序 然后设计引物克隆
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Never_regret.If_it's_good,it's_wonderful.If_it's_bad,it's_experience.
3楼2011-10-26 16:56:06
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

kaizi0311(金币+1): 谢谢啊 2011-10-31 11:29:14
新分离的菌株可以鉴定一下16S确定是哪个种，看看有没有这株菌的相关文献。细菌的这种杀虫蛋白应该是分泌到胞外的，可以试试收集培养液上清，跑胶看看蛋白有多少种。种类不多的话可以质谱鉴定条带。蛋白种类多的话可以尝试用分子筛或者HPLC分离组分，寻找杀虫的组分，进一步鉴定。
找到蛋白后质谱鉴定，根据质谱结果搜库查询是什么蛋白，在NCBI上查找这个蛋白，应该能找到对应的基因。要是NCBI上都没有，那楼主可是挖到金矿了！！
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5楼2011-10-27 10:18:12
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