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中国药典用的细菌生化反应培养基
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下列各类培养基常用于测定细菌的糖类代谢试验、氨基酸和蛋白质代谢试验、碳源和氮源利用试验等生化反应。 1. 糖、醇发酵培养基 （1）成分 基础液 蛋白胨 10ml 氯化钠 5g 0.5%酸性品红指示液 10ml （或0.4％溴麝香草酚蓝指示液）( 6 ml ) 水 1000ml 糖、醇类 每100ml 基础液内各加0.5g （2）制法 取蛋白胨和氯化钠加入水中，微温使溶解，调pH 值使灭菌后为7.3±0.1，加入指示液混匀。每100ml 分别加人l 种糖、醇或糖苷，混匀后分装于小管中（若需观察产气反应，在小管内另放置杜汉小倒管）。于116 ℃ 灭菌15 分钟。 常用的糖、醇或糖苷：阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、蕈糖、纤维二糖、蜜二搪、棉子糖、松三糖、菊糖、糊精、淀粉、甘露醇、卫矛醇、山梨醇、肌醇、甘油、水杨素、七叶苷等。 （3）用途 鉴别各种细菌对糖类的发酵生化反应，发酵者产酸，培养基变色（加酸性品红者由无色至红色或再至黄色；加溴麝香草酚蓝者由蓝色至黄色）；产气时，小倒管内有小气泡。 2 ．七叶苷培养基 （1）成分 蛋白胨 5g 七叶苷 3g 磷酸氢二钾 1g 水 1000ml 枸橼酸铁 0.5g ( 2 )制法 除七叶苷外，取上述成分混合，微温使溶解，加入七叶苷混匀，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1，分装于试管中，121 ℃ 灭菌15 分钟。 ( 3 )用途 用于鉴别细菌对七叶苷的水解试验，产生棕黑色沉淀为阳性反应。 3 ．磷酸盐葡萄糖胨水培养基 ( 1 ）成分 蛋白胨 7g 葡萄糖 5g 磷酸氢二钾 3.8g 水 1000ml ( 2 )制法 取上述成分混合，微温使溶解，调pH值使灭菌后为7.3 士0.1 ，分装于小试管中，121 ℃ 灭菌15 分钟。 ( 3 )用途 用于鉴别细菌的甲基红试验（M-R 反应）和乙酰甲基甲醇试验（V-P 反应）。 1甲基红试验（M-R 反应）取可疑菌落或斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，置35 ℃ 培养2 ～ 5 天，于培养管内加人甲基红指示液（称取甲基红0.1g，加95 ％乙醇300ml，使溶解后，加水至500ml）数滴，立即观察，呈鲜红色或橘红色为阳性，呈黄色为阴性。 2乙酰甲基甲醇生成试验（V-P 反应） 取可疑菌落或斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，置35 ℃ 培养48 小时，量取2ml 培养液，加入α-萘酚乙醇试液（称取α－萘酚5g ，加无水乙醇溶解使成100ml ) 1ml , 混匀，再加40％氢氧化钾溶液0.4ml ，充分振摇，立刻或数分钟内出现红色，即为阳性反应；无红色反应为阴性，如为阴性反应，置35 ℃ 水浴4 小时后再观察。 4 ．蛋白胨水培养基 ( l )成分 蛋白胨 10g 水 l000ml 氯化钠 5g ( 2 )制法 取上述成分混合，微温使溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，分装于小试管，121 ℃ 灭菌15 分钟。 ( 3 )用途 用于鉴别细菌能否分解色氨酸而产生靛基质的生化反应。 ① 靛基质试验取可疑菌落或斜面培养物，接种于蛋白胨水培养基中，置35 ℃ 培养24～48 小时，必要时培养4～5 天，沿管壁加人靛基质试液数滴，液面呈玫瑰红色为阳性，呈试剂本色为阴性。 ② 靛基质试液 称取对二甲氨基苯甲醛5g ，加入戊醇（或异戊醇）75ml ，充分振摇，使完全溶解后，再取盐酸25ml 徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深．或称取对二甲氨基苯甲醛1g ，加人95 ％乙醇95ml ，充分振摇，使完全溶解后，再取盐酸20ml 徐徐滴入。 5 ．三糖铁琼脂培养基 ( l ）成分 蛋白胨 20g 硫酸亚铁 0.2g 牛肉浸出粉 5g 硫代硫酸钠 0.2g 乳糖 10g 002％酚磺酞指示液 12.5ml 蔗糖 10g 琼脂 12～15g 葡萄糖 1g 水 1000ml 氯化钠 5g ( 2 )制法 除乳糖、蔗糖、葡萄糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，加入琼脂，加热溶胀后，再加入其余成分，摇匀，分装，121 ℃ 灭菌15 分钟，制成高底层（2 ～3cm ) 短斜面。 ( 3 )用途 用于初步鉴别肠杆菌科细菌对糖类的发酵反应和产生硫化氢试验。 方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，做高层穿刺和斜面划线接种，置35 ℃ 培养24～ 48 小时，观察结果。培养基底层变黄色为葡萄糖发酵阳性，斜面层变黄色为乳糖、蔗糖发酵阳性；底层或整个培养基呈黑色表示产生硫化氢。 6.克氏双糖铁琼脂培养基 ( l )成分 蛋白胨 20g 枸橼酸铁 0.3g 牛肉浸粉 3g 硫代硫酸钠 0.3g 酵母浸粉 3g 002 ％酚磺酞指示液 12 .5ml 乳糖 10g 琼脂 12～15g 葡萄糖 1g 水 1000ml 氯化钠 5g ( 2 )制法 除乳糖、葡萄糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 , 加入琼脂，加热溶胀后，再加入其余成分，摇匀，分装，121 ℃ 灭菌15 分钟，制成高底层（2～ 3cm ）短斜面。 ( 3 )用途 用于初步鉴别肠杆菌科细菌对糖类的发酵反应和产生硫化氢试验。 方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，做高层穿刺和斜面划线接种，置35 ℃ 培养24～ 48 小时，观察结果。培养基底层变黄色为葡萄糖发酵阳性，斜面层呈黄色为乳糖发酵阳性，斜面层呈红色为乳糖发酵阴性；底层或整个培养基呈黑色表示产生硫化氢。 7.脲（尿素）培养基 ( 1 )成分 蛋白胨 1g 0.2 ％酚红溶液 6ml 葡萄糖 1g 20%无菌脲溶液 l00ml 氯化钠 5g 水 1000ml 磷酸氢二钾 2g ( 2 )制法 除脲溶液外，取上述成分，混合，调pH 值使灭菌后为6.9 士0.1 ，混匀后，121 ℃ 灭菌15 分钟，冷至50 ～ 55 ℃ ，加人无菌脲溶液（经膜除菌过滤），混匀，分装于灭菌试管中。 ( 3 )用途 用于鉴别细菌的尿素酶反应。 方法和结果观察：取可疑菌落或少量斜面培养物接种于培养基内，置35 ℃ 培养24 小时，观察结果。培养基变为红色为尿素酶反应阳性；不变色为阴性，阴性者需延长观察至1 周。 8 ．苯丙氨酸琼脂培养基 ( 1 )成分 磷酸氢二钠 1g 氯化钠 5g 酵母浸膏 3g 琼脂 12 ～ 15g DL-苯丙氨酸（DL - phenylalanine ) 2g （或L-苯丙氨酸）( 1g ) 水 1000ml ( 2 )制法 除琼脂外，取各成分溶于水，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，再加入琼脂，加热溶胀，分装试管，121 ℃ 灭菌15 分钟，制成长斜面。 ( 3 )用途用于鉴别细菌的苯丙氨酸脱氨酶试验（也称苯丙酮酸试验）。 方法和结果观察：取斜面培养物，大量接种于苯丙氨酸琼脂斜面，置35℃培养4 小时或18～ 24 小时，取4～ 5 滴10 ％三氯化铁溶液试剂，由斜面上部流下，若出现墨绿色，即为苯丙氨酸脱氨酶试验阳性；倘若不变色则为阴性。 9.氨基酸脱羧酶试验培养基 ( 1 ）成分 ① 基础液 蛋白胨 5g 1.6 ％溴甲酚紫指示液 lml 酵母浸出粉 3g 水 1000ml 葡萄糖 1g ② 氨基酸 L－赖氨酸 0.5g （需加碱溶液溶解） L-鸟氨酸 0.5g（需加碱溶液溶解） L-精氨酸 0.5g（不需加碱溶液溶解） ( 2 )制法 先配制基础液备用；将溶解后的3 种氨基酸，各分别加至100ml 基础液（使氨基酸的终浓度为0.5 % ) ，混匀，调pH 值使灭菌后为6.8 。分装于小试管中，每管2.5ml 并滴加1 层液体石蜡；同时分装一部分基础液于小试管，作为对照培养基，均置116 ℃ 灭菌10 分钟。 ( 3 )用途 用于鉴别细菌的脱羧酶、双水解酶试验。 方法和结果观察：取疑似菌斜面培养物分别接种于上述3 种培养基及基础液对照培养基，置35 ℃ 培养24 ～ 48 小时。在培养初期由于待检细菌发酵葡萄糖产酸，试验培养基和对照培养基应呈黄色，继续培养时，试验培养基如呈紫色或紫红色，即为阳性反应；如至培养末期，培养基仍同对照管呈黄色，则判为阴性反应。 10.明胶培养基 ( l )成分 蛋白胨 5g 明胶 120g 牛肉浸出粉 3g 水 1000ml ( 2 )制法 取上述成分加人水中，浸泡约20 分钟，加热溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，分装于小试管中，121 ℃ 灭菌15 分钟。 ( 3 )用途 用于细菌的明胶液化试验。 方法和结果观察：取少量待检菌斜面培养物穿刺接种于明胶培养基内，置35 ℃ 培养24 小时，取出置冰箱内10～ 20 分钟。如培养基仍呈溶液状，则为阳性； 培养基重新凝固，则为阴性。细菌液化明胶之作用有时甚为缓慢，如未见液化，需继续培养1 ～ 2 周方可确定阴性。 11 ．丙二酸钠培养基 ( 1 )成分 酵母浸出粉 1g 磷酸二氢钾 0.4g 氯化钠 2g 丙二酸钠 3g 葡萄糖 0.25g 0.4 ％溴麝香草酚蓝指示液 6ml 硫酸铵 2g 水 l000ml 磷酸氢二钾 0.6g ( 2 ) 制法 除指示液外,将上述成分溶解，调pH 值使灭菌后为6.8 ，再加入指示液。分装小管中．121 ℃ 灭菌15分钟。 ( 3 )用途 用于鉴别细菌能否利用丙二酸钠作为碳源而生长繁殖。 方法和结果观察：取斜面或肉汤培养物接种于丙二酸钠培养基内，置35 ℃ 培养48 小时．于24 小时和48 小时后各观察1 次结果。培养基颜色由绿色变成蓝色为阳性反应；无颜色变化，或由绿色变成黄色，则为阴性反应。 12 .枸橼酸盐培养基 ( 1 )成分 氯化钠 5g 枸橼酸钠（无水） 2g 硫酸镁 0.2g 1.0 ％溴麝香草酚蓝指示液 10ml 磷酸氢二钾 1g 琼脂 14g 磷酸二氢铵 1g 水 l000ml ( 2 )制法 除指示液和琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调pH 值使灭菌后为6.9 士0.1 ，加入琼脂，加热溶胀，然后加入指示液，混匀，分装于小试管中，121 ℃ 灭菌15 分钟，制成斜面． （3 ）用途 用于鉴别细菌能否利用枸橼酸盐作为碳源和氮源而生长繁殖。 方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，接种于枸橼酸盐培养基的斜面上，一般培养48 ～ 72 小时，凡能在培养基斜面生长出菌落，培养基即由绿色变成蓝色者为阳性反应；无菌落生长，培养基仍绿色者为阴性反应，阴性反应者应继续培养观察至7 天。 13．硝酸盐胨水培养基 （1）成分 蛋白胨 10g 硝酸钾 2 g 酵母浸出粉 3g 水 1000ml ( 2 )制法 取上述成分，加热溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，分装于小试管中，121 ℃ 灭菌15 分钟。 ( 3 )用途 用于鉴别细菌能否还原硝酸盐成亚硝酸盐。 方法和结果观察：取待检菌培养物接种于硝酸盐胨水培养基中，置35 ℃ 培养24 小时。将下列甲液和乙液于用前等量混合，每个培养物加混合物0.1 ml，产生红色为阳性反应，不产生红色为阴性反应。 甲液：称取α－萘胺5g，溶解于5mol / L 醋酸l000ml 中。 乙液：称取磺胺酸（对氨基苯磺酸）8g ，溶解于5mol / L 醋酸1000ml 中。 14 ．石蕊牛奶培养基 ( l )成分 脱脂奶粉 10g 水 100ml 10 ％石蕊溶液 0.65ml ( 2 )制法 取上述成分混匀后，分装于小试管中．116 ℃ 灭菌10 分钟， ( 3 )用途 用于检查细菌对牛奶的凝固和发酵作用。 15.半固体营养琼脂培养基 ( l )成分 蛋白胨 10g 琼脂 4g 牛肉浸出粉 3g 水 l000ml 氯化钠 5g ( 2 )制法除琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调pH 值使灭菌后为7.2 士0.2 ，再加入琼脂，加热溶胀，分装于小管中，121 ℃ 灭菌15 分钟后，直立放置。待凝固后备用 ( 3 )用途 用于观察细菌的动力，也可用于一般菌种的保存。 细菌动力检查：取疑似菌斜面培养物穿刺接种于半固体营养琼脂培养基中，置35 ℃ 培养24小时，细菌沿穿刺外周扩散生长．为动力阳性；否则为阴性。阴性者，应再继续培养观察2 ～ 3 天。 |
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