24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1792  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

清风寨

银虫 (小有名气)

[求助] 基因敲除细胞阳性纯和子筛选

本人现在想做了基因敲除的细胞,想了想我的载体上除了荧光没有其他筛选标记也没有抗药性  。想分出阳性细胞可是我所知道的只有用96孔板来稀释 ,这是很笨的方法不知各位高手有没有好的方法。另外敲除的细胞很大可能是杂合子 等位基因还能表达 ,我只想得到纯和子 不知各位有什么好的办法  谢谢
回复此楼
冷风过心变热
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1直唱情歌

新虫 (初入文坛)

没有抗药性的话怎么把敲除的和没敲除的分开呢?楼主是不是记错了啊。我现在做也是这样的,我的载体是抗嘌呤霉素的,单克隆已经挑出来了,现在就有待验证是不是纯合子了。
11楼2015-05-17 08:40:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

清风寨(金币+2): 谢谢 我做的是细胞 我后面要检测酶活 DNA 还有RNA的 觉的拿到纯合子比较好讲故事 2011-10-09 21:10:41
1.你敲除的是什么细胞?动物?植物?真菌?还是细菌?如果是后两个不大需要考虑是否纯合子的问题,植物的么,笨方法就是不断的自交,拿到纯合子,动物细胞没做过,不了解,
2、不过我觉得你可以试一下用流式细胞术加细胞分拣,这方面的文献应该有不少,就是基于荧光进行细胞分拣的,
显微镜下的世界很精彩!
2楼2011-10-09 21:01:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

额。植物和微生物都做过,细胞还真不知道……没做过啊
显微镜下的世界很精彩!
3楼2011-10-09 21:11:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hf2016

金虫 (正式写手)

送鲜花一朵
坐等答案揭晓
一切开始于结束之后
4楼2011-10-09 21:13:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见