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pidou213木虫 (正式写手)
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[求助]
膜蛋白表达
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没有去掉膜蛋白的跨膜区，但是在其序列前端加上了分泌信号肽a-factor，请问这样的蛋白 1、能表达吗？ 2、能够分泌表达吗？ |
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 【分子生物】EPI帖 |
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红多多
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+7, MolEPI+1): 回答很好，有经验的人啊，很好！感谢分享资料！ 2011-10-08 16:03:21
mengfei8336(MolEPI+1): Thank you. 2011-10-08 16:13:00
pidou213(金币+3): 谢谢你 如此细心的讲解 2011-10-09 00:19:18
西瓜(金币+7, MolEPI+1): 回答很好，有经验的人啊，很好！感谢分享资料！ 2011-10-08 16:03:21
mengfei8336(MolEPI+1): Thank you. 2011-10-08 16:13:00
pidou213(金币+3): 谢谢你 如此细心的讲解 2011-10-09 00:19:18
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呵呵 真核表达也分胞内和胞外的 如果不分泌 能在细胞内富集也算是表达了 部分非分泌蛋白最好采用没有信号肽的载体表达 因为这样对于模拟蛋白的天然环境和生物学结果是很有必要的。如果蛋白是表达型蛋白那么你就应该采用有信号肽的载体，因为在分泌过程中 蛋白会被加工和修饰，这种结构上细微的改变有时候对蛋白的结构和功能是很重要的。含有跨膜结构域的蛋白你也没有必要刻意的去利用突变的方法来获得高效表达的蛋白，有跨膜结构域的一般都是膜结合蛋白，这些蛋白的正确折叠往往需要生物膜结构的参与，如果你需要功能活性一定要考虑到这些问题。我以前为了图方便大量制备蛋白，加信号肽，定点突变，得到蛋白制备抗体……当然有时候这个对于简单折叠的蛋白没有太大问题，甚至我有时候就表达蛋白的部分结构域也能达到效果，但是，如果蛋白折叠复杂了，这种抗体是很难制备的，所以后来我就很注意这方面的问题了。你应该是刚刚开始做，传你个专门做毕赤酵母的说明书，你可以看看。 |
4楼2011-10-08 15:01:32
红多多
木虫 (正式写手)
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2楼2011-10-08 00:42:51
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3楼2011-10-08 13:31:45
