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lh_imm木虫 (正式写手)
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[求助]
求助关于大鼠急性心肌缺血模型的问题
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| 课题目前需要评价某个药物对大鼠急性心肌缺血的保护作用，现在发现造成大鼠急性心肌缺血有两种方法，一种是注射异丙肾上腺素（或者垂体后叶素）的药物造模法，另一种是结扎冠状动脉左前降支的手术造模法，不知这两种方法造成的模型有何异同，请有经验虫友介绍一下，谢谢~ |
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coolsongerun
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2楼2011-10-20 22:06:14
coolsongerun
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karl2100(金币+1): 谢谢提供！ 2011-10-21 10:10:38
karl2100(金币+1): 谢谢提供！ 2011-10-21 10:10:38
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心肌梗死实验方法交流 一、儿茶酚胺引起心肌坏死模型 [造模机制] 儿茶酚胺通过收缩冠状动脉、增强心肌收缩力和增加心肌耗氧量等多方面机制诱发心肌坏死。 [实验动物] 常用体重100~200g大鼠，性别不限。 [器材与试剂] 带针形电极的心电图机或示波器，或生理记录仪。 儿茶酚胺：常用异丙基肾上腺素水溶液，也可用去甲基肾上腺素。 [操作步骤] 需及时描记心电图时可事先将大鼠用乙醚轻度麻醉，仰卧位将头和四肢固定，用胸导联、Ⅱ导联记录心电图。也可先注药，然后定时观察心电变化。 于大鼠后肢大腿内侧皮下注射（也可腹腔注射）异丙基肾上腺素水溶液，每日1次，每次剂量按1~10mg/kg体重，连续注射2d。每次注射后1、5、10、30、45……min均可记录心电图，观察急性心肌缺血改变。 一般首次注射后第3~4d即形成境界清晰的心肌坏死灶，第7d病灶内成纤维细胞明显增多，第3周后进入心肌纤维化阶段。 [病变特点] 末次注射后48h做心脏病理检查，绝大多数动物均可见到境界清楚的心肌坏死灶。这类病灶有的是清净少细胞的坏死后空架；更多的是巨噬细胞反应强烈、成纤维细胞增生旺盛的多细胞病灶。坏死灶主要分布在左心室壁和室间隔上，尤以靠近心尖部为重。通常较大的病灶多分布在乳头肌及内层心肌，而中、外层心肌病灶一般较小。在心壁内层的病灶可见紧贴心内膜下常保留1~2条未坏死的心肌细胞，但这种保留不如典型心肌梗死那样完全，有的部位坏死可直达心内膜。心肌坏死灶常围绕冠状动脉小分支分布。 心肌坏死或纤维化的范围可用图像分析系统计量观察，心肌纤维化还可以做胶原含量的检测。 [模型评价] 儿茶酚胺致心肌坏死模型的复制方法简便，效果稳定可靠。儿茶酚胺具有收缩冠状动脉、增强心肌收缩力等多方面的作用，在心肌坏死的病理特点和发生机制上与人类缺血缺氧性心肌缺死有某些类似之处。此类模型可用于心肌坏死、心肌纤维化的发生机制和药物筛选等实验研究。 二、垂体后叶素引起心肌坏死模型 [造模机制] 垂体后叶素能强烈收缩冠状动脉，从而引起心肌缺血缺氧性坏死。 [实验动物] 成年大鼠或家兔，本节以大鼠为例，性别不限。 [操作步骤] 描记心电图的处理同前。 于大鼠大腿外侧肌肉注射垂体后叶素（即血管加压素，pitressin, vasopressin）注射液，每日1次，每次剂量为10~20 U/kg体重，连续注射2d。 每次注射后1、5、10、30……min，用带针形电极的心电图机描记心电图，观察心肌急性缺血改变。 注射垂体后叶素后心肌出现坏死和纤维化的时序与异丙基肾上腺素引起的大鼠心肌坏死大致相近，可于末次注射后第2d、第1周、第3周取心脏进行病理观察。 [病变特点] 末次注射后48h取心脏做病理检查，多数大鼠心肌内发生多发性小灶状心肌坏死，坏死灶内心肌细胞消失，出现大量巨噬细胞及成纤维细胞。坏死灶一般都很小，以左心室壁的内、中层和室间隔为最多。少数动物在心室壁可形成典型的大片状、带状梗死，梗死灶内心肌凝固性坏死伴有出血，心内膜下可保留一薄层未坏死的心肌细胞。 [模型评价] 本模型可用于缺血缺氧性心肌损害的发生机理、防治方法的实验研究。从病理模型来讲，垂体后叶素引起心肌坏死的范围与数量在不同的动物个体之间差别较大，不如异丙基肾上腺素引起的心肌坏死稳定。 三、结扎冠状动脉引起心肌梗死模型 结扎冠状动脉大支造成心肌梗死，以往常用犬、猪等为实验对象，但有费用昂贵、饲养不便等缺点，故近年来转而多用小动物。用大鼠制造心肌梗死的方法，经Selye简化、Bajusz改进而趋于成熟，现在国内外已普遍使用。这里以大鼠为例进行介绍。 [造模机制] 结扎动物的左冠状动脉前降支引起所供血区域的心肌梗死。梗死发生快、缺血的区域大致固定，并可进行动力学、心电图监视、组织学检查和血清酶学等指标，综合评价梗死范围和损伤程度。 [实验动物] 一般选用体重200~300g大鼠，性别不限。 [器材与试剂] 大鼠专用气管插管与微型人工呼吸器 [操作步骤] 乙醚麻醉大鼠，仰卧位固定，胸部剪毛，碘酒-酒精消毒皮肤。 有条件时使用气管插管，连接微型人工呼吸器，安置体表心电图进行监视。不用气管插管也可进行此类手术，只是手术的安全性较差。 在胸骨左侧与胸骨平行作一纵行切口，切开皮肤及胸大肌，暴露肋骨。在距胸骨约0.5cm外剪断第5、6肋软骨，打开胸腔，剪开心包，暴露心脏。轻压胸廓即可将心脏挤出胸腔外。Bajusz介绍的方法只剪断第6肋软骨，或不切断肋软骨，只是把第5和第6肋软骨之间的间隙用镊子加以扩宽，也可将心脏挤出来。 大鼠冠状动脉自主动脉分出后即进入心肌，肉眼很难识别，需借助解剖标志确定其位置。如需结扎左冠状动脉，在心脏挤出后用左手的拇指和食指夹住鼠心，心尖指向头侧稍偏右。用小弯针穿000000号丝线，从肺动脉圆锥左缘进入，从此进入点和左心耳根部假想联线的中间穿出，连同线穿过的心肌一并结扎。结扎部位大约距左冠状动脉开口下1mm。如需结扎右冠状动脉，用特制的拉开器拉开右心耳，在肺动脉圆锥右缘，靠近主动脉的室壁结扎。结扎后将心脏放回胸腔。 用心电图监视，判定结扎成功后，用切开胸腔时已预留的缝合线紧闭胸壁。缝合皮肤。撤掉气管插管及心电电极。 在结扎的当时心电图即显示急性缺血改变，如II导R波高尖、ST段抬高、Q波出现和加深等。结扎24h后光镜下可判断心肌梗死改变；结扎后第4~7d梗死灶周边即有活跃的肌成纤维细胞和成纤维细胞增生；第2~3周进入修复性纤维化阶段；第4周可形成肉眼能看出的瘢痕。 [病变特点] 在结扎后短时间、光镜下心肌梗死病变尚未充分发展之前，可用心脏标本组织化学染色显示心肌缺血造成的脱氢酶活性脱失。例如将心肌组织放入新配制的盐酸硝基四氮唑蓝溶液中，正常心肌呈蓝色，梗死心肌不着色。并可藉以计算梗死范围。 在结扎后第3~4d，光镜下可见心肌梗死的典型改变：①梗死灶的中心部位，心肌细胞和心肌间质一并陷于凝固性坏死，坏死肌细胞嗜伊红浓染，核破裂消失。有些部位可见间质出血或中性白细胞浸润。②梗死灶的外周部分，有的部位可见心肌细胞的收缩带坏死（contraction-band necrosis）和凝固性肌溶解（coagulative myocytolysis）。③在梗死灶的周围，有的部位可见一带心肌细胞出现空泡变性，甚至陷入液化性肌溶解（colliquative myocytolysis）。④梗死部位的心内膜下层、静脉窦的周围，常保留一薄层未陷于坏死或仅有空泡变性—液化性肌溶解的心肌细胞。 [模型评价] 结扎冠状动脉的心肌梗死模型效果确实，可用于冠心病心肌梗死的发生机理、防治方法的实验研究。用大鼠进行这类手术的死亡率与操作的熟练程度以及人工呼吸装置采用与否有关。一般术后成活率可达60%或更高，有的资料称术后24h雄鼠死亡率约为38%，雌鼠为20%。 |
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