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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 农林 » 作物 » 急求！！植物叶片中硝酸还原酶、谷酰胺合成酶、天门冬酰胺合成酶活性的测定方法
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可爱猫

新虫 (正式写手)

[求助] 急求！！植物叶片中硝酸还原酶、谷酰胺合成酶、天门冬酰胺合成酶活性的测定方法

哪位高手有植物叶片中硝酸还原酶、谷酰胺合成酶、天门冬酰胺合成酶活性的测定方法啊，尤其是天门冬酰胺合成酶活性的方法，都查不到文献啊，急用啊！！

[ Last edited by 可爱猫 on 2011-9-5 at 11:09 ]
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单身是领悟,恋爱是失误,分手是觉悟,结婚是错误,离婚是醒悟,再婚是执迷不误,没情人是废物,情人多了是保护动物,问世间情为何物?
1楼 2011-09-05 11:08:04
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

laoganbu33

木虫 (小有名气)

菜鸟

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
缺友情(金币+5): 挺不错，鼓励应助！欢迎常来农林版！ 2011-12-04 21:11:04
可爱猫: 回帖置顶 2011-12-15 14:12:52
可爱猫(金币+10): 很详细，谢谢了 2011-12-15 14:13:34
剑叶硝酸还原酶（NR）活性的测定  采用活体法测定。
谷氨酰胺合成酶（GS）活性的测定  称取籽粒1g于研钵中，加3ml提取缓冲液（0.05mol/L Tris-HCl，pH8.0），置冰浴上研磨匀浆，转移于离心管中，4℃下16114×g离心20min，上清液即为粗酶液。在1.6mL反应混合液（0.1mol/L Tris-HCl缓冲液，80mol/L盐酸羟胺，pH7.4）中，加入0.7mL粗酶液和0.7mL 40mmol/L ATP溶液，混匀，于37℃下保温0.5h，加入显色剂（0.2mol/L TCA，0.37mol/LFeCl3和0.6mol/L HCl混合液）1mL，摇匀并放置片刻后，于1790×g下离心10min，取上清液测定540nm处的吸光值，以加入1.6mL反应混合液（0.1mol/L Tris-HCl缓冲液，pH7.4）为对照。
谷氨酸合成酶（GOGAT）活性的测定    参照Lin（1996）的方法，反应混合物总体积3mL（内含0.4mL 20mML-谷氨酰胺，0.05mL 0.1Mα-酮戊二酸，0.1mL 10mMKCl，0.2mL3mM NADH和0.5mL酶液，不足体积用25mM pH7.6 Tris-HCl缓冲液补足），反应由L-谷氨酰胺启动，340nm下测定消光值的变化。1min下降的消光值作为一个酶活性单位。
谷氨酸脱氢酶（GDH）活性的测定    参照Lin（1996）的方法。称取鲜样1.000g置于预先冷冻过的研钵中，加入少量石英砂和6mL提取液（10mMTris-HCl缓冲液，pH7.6，内含1mMMgCl2，1mMEDTA和1mM的β-巯基乙醇），冰浴下研磨至匀浆，倒入离心管，4℃下15000×g离心30min，上清液即为酶液。反应混合物中包括0.3mL0.1mMα-酮戊二酸，0.3mL1MNH4Cl，0.2mL3mMNADH和1mL酶提取液，不足体积用0.2MTris-HCl缓冲液补足，反应由酶液启动，340nm下测定消光值的变化。1min下降的消光值作为一个酶活性单位。


根据测定对象，每个方法中得样品量可以减少。

你看看对你是否有所帮助，呵呵
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我是菜鸟我怕谁
6楼2011-12-04 16:31:59
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普通回帖

可爱猫

新虫 (正式写手)
怎么没人回呢，自己顶一个
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单身是领悟,恋爱是失误,分手是觉悟,结婚是错误,离婚是醒悟,再婚是执迷不误,没情人是废物,情人多了是保护动物,问世间情为何物?
2楼2011-09-06 12:43:03
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可爱猫

新虫 (正式写手)
自己顶
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单身是领悟,恋爱是失误,分手是觉悟,结婚是错误,离婚是醒悟,再婚是执迷不误,没情人是废物,情人多了是保护动物,问世间情为何物?
3楼2011-09-07 21:09:05
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dongxl1979

铁虫 (小有名气)
帮忙顶一下
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4楼2011-09-08 00:12:31
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可爱猫

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dongxl1979 at 2011-09-08 00:12:31:
帮忙顶一下

谢谢！！
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单身是领悟,恋爱是失误,分手是觉悟,结婚是错误,离婚是醒悟,再婚是执迷不误,没情人是废物,情人多了是保护动物,问世间情为何物?
5楼2011-09-09 10:44:40
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guoyu0731

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by laoganbu33 at 2011-12-04 16:31:59
剑叶硝酸还原酶（NR）活性的测定  采用活体法测定。
谷氨酰胺合成酶（GS）活性的测定  称取籽粒1g于研钵中，加3ml提取缓冲液（0.05mol/L Tris-HCl，pH8.0），置冰浴上研磨匀浆，转移于离心管中，4℃下16114×g离心 ...

有个问题请教一下，1.6ml反应混合液（0.1Mtris-hcl缓冲液，80M盐酸羟胺，PH-7.4）中，这个反应液是怎么配的？是用缓冲液配制80M盐酸羟胺吗？
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7楼2014-09-23 17:05:11
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guoyu0731

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by laoganbu33 at 2011-12-04 16:31:59
剑叶硝酸还原酶（NR）活性的测定  采用活体法测定。
谷氨酰胺合成酶（GS）活性的测定  称取籽粒1g于研钵中，加3ml提取缓冲液（0.05mol/L Tris-HCl，pH8.0），置冰浴上研磨匀浆，转移于离心管中，4℃下16114×g离心 ...

请教一下，1.6ml反应混合液（0.1Mtris-hcl缓冲液，80M盐酸羟胺，PH-7.4）中，这个反应液是怎么配的？是用缓冲液配制80M盐酸羟胺吗？
跪求回复！！！
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8楼2014-10-14 21:24:37
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季铵盐

新虫 (初入文坛)
你好，你们做过NR和NIR活性吗？有没有比较成熟的方法呢？
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9楼2016-07-22 17:11:57
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2014050363

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by laoganbu33 at 2011-12-04 16:31:59
剑叶硝酸还原酶（NR）活性的测定  采用活体法测定。
谷氨酰胺合成酶（GS）活性的测定  称取籽粒1g于研钵中，加3ml提取缓冲液（0.05mol/L Tris-HCl，pH8.0），置冰浴上研磨匀浆，转移于离心管中，4℃下16114×g离心 ...

请教大神，根系里面的消光值是下降的，叶片里面是上升的，怎么解？
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10楼2017-01-04 16:22:23
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