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liukgg

木虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE

最近做谷氨酸棒杆菌诱导蛋白的蛋白电泳，不知道什么原因跑出来的结果没有条带，我是跑的全菌体，加上loading buffer后100℃金属浴5/10分钟（做了两次，一次五分钟，一次十分钟），上样20µl，浓缩胶跑的电压是90v，分离胶是120v，跑出来的结果是MAEKER正常，其他泳道什么都没有。自己一块跑的纯化的蛋白没有问题（一块制的胶）。诱导后的发酵液取100µl后离心能都看到挺多的菌体沉淀，第一次遇见这种情况，请大家帮忙分析一下原因。谢谢

[ Last edited by liukgg on 2011-9-2 at 21:51 ]
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山水凤凰
1楼 2011-09-02 21:48:54
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lijunqing525

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

liukgg(金币+1, 博学EPI+1): 谢谢回帖 2011-09-03 21:17:40
楼主，你应该把菌体破碎了跑电泳啊！我做大肠杆菌一般是用超声仪破碎的。
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宠辱不惊，看庭前花开花落；去留无意，看天外云卷云舒。
2楼2011-09-03 16:06:57
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liukgg

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lijunqing525 at 2011-09-03 16:06:57:
楼主，你应该把菌体破碎了跑电泳啊！我做大肠杆菌一般是用超声仪破碎的。

跑全菌体的话不用破碎就行吧，只是鉴定有没有表达而已，煮沸的过正中菌体会自然裂解开的
赞一下 回复此楼
山水凤凰
3楼2011-09-03 16:43:53
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science06

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

liukgg(金币+1): 谢谢回帖 2011-09-04 22:31:11
应该破碎菌体蛋白，并统一各个样品的蛋白浓度一致，
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4楼2011-09-04 17:14:52
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liukgg

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by science06 at 2011-09-04 17:14:52:
应该破碎菌体蛋白，并统一各个样品的蛋白浓度一致，

谢谢，试过了，没用
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山水凤凰
5楼2011-09-04 22:30:58
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