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塞外雨

金虫 (著名写手)

[交流] 提取肝脏蛋白 已有2人参与

称取0.3g肝脏,用生理盐水洗涤,加600uL裂解液,使用冰浴研磨,14000离心1h,取上清。
配制了裂解液:7mol/L尿素,2mol/L硫脲,4%(w/V)CHAPS,65mmol/L二硫苏糖醇(DTT),40mmol/L三羟甲基胺基甲烷(Tris))

使用丙酮沉淀后,用SDS-PAGE的LoadingBuffer溶解时有些不溶,跑电泳只能看到大约7-8条带,这次改用裂解液溶解,不知道大伙是怎么溶解的?今天的蛋白电泳结果还没有出来
出来了,都是弥散的,一条带也没有哎好郁闷啊,是因为没有加蛋白酶抑制剂吗?
谢谢

[ Last edited by 塞外雨 on 2011-8-25 at 08:33 ]
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只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
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lavender169

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-08-30 18:51:21
提蛋白你都不加蛋白酶抑制剂的吗 如果是特殊的蛋白还的加特殊抑制剂,比如磷酸化蛋白需加磷酸化蛋白酶抑制剂。还有就是注意控制温度 冰上操作。
::::::::::::::::jusmine:::::::::::::::
5楼2011-08-30 10:34:10
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塞外雨

金虫 (著名写手)

指导一下好吗
只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
2楼2011-08-25 08:34:51
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